Ac anti-nucléaires - Laboratoire CERBA

1 Acanti-nucl airesLes anticorpsanti-nucl aires(ANA) sont des autoanti-corps dirig scontre lesconstituantsdunoyau extension,on yinclut les anticorpsreconnaissantcertainscomposants du cytoplasmeet du ANA sont recherch s,avec les facteursrhumato -des, d s qu unemaladieautoimmunenon sp cifiqued organeest suspect techniquede r f renceestl immunofluorescenceindirecte(IFI) sur s leur diagnosticet leur titrage,diff rentestech-niquesd identificationpeuvent treeffectu es(immuno-diffusionradiale,techniquesimm unoenzymatiques, ),qui pr cisentleur sp cificit etpermettentleur ,la recherchedes ANA tire son origineduph nom nedescellulesLE(oucellulesdeHargraves)

2 D criten1948parHargraves,RichmondetMorton, pre-mier test diagnostiquedu lupus syst lesann es qui ont suivi, il a t montr que ce ph nom ne tait d des immunoglobulineset que le s rum depatientslupiques,enIFI,marquaitdefa onhomog ,Beckmontraitqueles rumdepatientsatteintsde diversesaffectionsrhumatologiquesmarquai tle noyau cellulairede fa on homog ne,mou-chet eounucl cours des ann es 1970 et 1980, les diff rentsaspectsde fluorescencerencontr sallaientensuite tre d crits,tirant notammentprofit de la diffusionde l utilisationdes cellulesHEp2 (humanepitheliomatype2cells)p oss dentun noyau de grandetaille, avec plu-sieurs nucl oles,et leur cytoplasmeest fix es, ce qui pr serveles antig nesnucl airessolubles(ENA :extractablenuclearantigens).

3 Leur uti-lisationpr sentede nombreuxavantagessur tout autresubstrat,notammentles coupes de foie de rongeurs: elles repr sententun substratplus sensibleet per-mettentl identificationde nombreuxaspectsde fluo-rescence; leur originehumaineassure une meilleuresp cificit que les tissus animaux; cultiv essur lame en couche unicellulaire,les noyauxsont bien visibles; la forte proportionde cellulesen divisionpermetdemieux visualiserles antig nesproduitsseulementaumomentde la mitose (tels que le fuseau mitotique)oude mieux les reconna tre(centrom res,PCNA :proli-feratingcell nuclearantigen); il n y apas de tissu conjonctifpour faire cran ; la distributiondes antig nesest utilisationest r pandueet permet une standardisa-tion des r sultats,gr ce notamment l existencedes rums aspects diff rentsont t d crits,correspon-dants plus de 100 caract ristiquesd un antig nemais des sp cificit sdiff rentespeuventdonnerdes aspectssimilaires.

4 Enfin,un m me patient peut pr senterplusieursANA dont lesaspectsen fluorescencese superposent,les uns pouvantmasquerles la d tectionet la caract risationdes ANA, il estrecommand de proc derpar tapes, en cascade:d pis-tage, titrage,puis premi re tape doitforc ment tre le d pistagepar IFI sur HEp2 :toutesautres techniquesdescreening,notammentcertaines techniquesELISA,abusivementappel es ANA parELISA , utilisantun puits de r actionrecouvertpar unm langedes ENA les plus fr quents(SSA, SSB, SmRNP, Scl-70) et d ADNnatif, sont bannir puisqu ellesamputentl tape premi rede diagnosticde toutes lesinformationsque seule l IFI peut apporter;notamment,diagnosticd anti-PCNA(pathognomoniquede lupussyst mique),d anti-centrom res(syndromeCREST),orientationvers un PM-Scl(fluorescencenucl olaire),vers un anticorpsanti-mitochondries,etc.

5 (tableau14).Apr s l tape en IFI, le laboratoiredoit tenter d identifierplus finementles r sultatslorsqu ilssont positifs (c est- -diresup rieursou gaux 160;N<80)par,auminimum,la recherched anti-ADNnatif et d anti-ENA,anticorpslesplusfr quemmentretrouv ga-tivit desanti-ADNnatifetdesanti-ENAn exclutpasunlupusouuneautreconnectivite:s elonlecontextecliniqueet l aspectde fluorescence,on pourraorienterlesrecherchesversd autresanticorps(anti-nucl osome,anti-histone,anti-PCNAsi suspicionde lupus, anti-PM-Scl,anti-Mi-2danslesmyosites). l inverse,dans certainescirconstances,des ANA taux significatifpeuvent tre d tect s(aspecthomo-g ne, mouchet )sans cible antig nique(ADN natif,ENA).

6 Il peut s agir de pathologiesrhumatismales,inflammatoires, infectieuses,de plus, cer-tains traitementsinduisentdes ANA taux faible,commela sulfasalazineet les anti-TNF- ,ces derniersinduisant galementdes anti-ADNnatif. Dans le casdes anti-TNF- ,lafr quenced apparitiondes ANA estproportionnelle ladur e du patientsne d veloppentun lupus que dans de tr s rares l absenced ANAen IFI sur HEp2 et quand lecontextecliniqueest vocateur,la recherched anti-SSA/Rodoit tre pratiqu e(par ELISA habituellement),car les cellulesHEp2 peuventparfois tre en d tiquedesdiff rentsaspectsdefluorescencedesanticorpsan tinucl airessurcellulesHEp2,avecauto-antig nesetpathologiescorrespondantsAspectdefl uorescencesurcellulesHEp2 Antig nesAssociationscliniquesADNn, Histone, nucl osomeHomog neLupus(chromatine)

7 Homog neet membrane nucl aireADNnLupusMembrane nucl airelin aireLaminesH patites autoimmunes, lupusGlycoprot inesdes pores nucl aires Cirrhose biliaireprimitiveMembrane nucl aireponctu e(gp210)PolymyositeMouchet e granulairetr s denseMi-2 Dermatomyosite(mitoses )Connectivitemixte ou syndrome deProt inesdelamatricenucl airesSharpMouchet e grains pais,matricehnRNPL upusRhumatismeschroniquesNucl aireConnectivitemixteMouchet e gros grainsU1-snRNP (ou Sm)LupusSSA/SSBLED,lupus cutan subaigu, Sj grenMouchet e grainsfinsScl rodermieARN polym rases II et IIISj grenMouchet e grainsfinsnucl airesADP-ribose polym raseTumeurspulmonaireset nucl olairesH patopathiesetpolyneuropathiesMouchet e grainstr s finsScl-70 (topoisom raseI)Scl rodermiesyst miqueDots nucl aires 2-6P80-coiline+snRNPC irrhose biliaireprimitive, h patitesCirrhose biliaireprimitive, Sj gren,Dots nucl aires multiplesProt ine Sp100rarement lupusHomog ne(+ noyau)

8 PM-SclPolymyosite-scl rodermiePolymyosite-scl rodermieHomog neKu,ADP-ribose polym raseLupus,Sj gren, autresNucl olaireU3-snRNPG ranulaire5%scl rodermiesyst miqueFibrillarineMouchet ARN polI30 %scl rodermiesyst miqueMouchet avec dots mitotiquesNOR-90 Scl rodermieavec RaynaudDots nucl aires et mitotiquesCentrom res (CENP-A/B)Syndrome CRESTNucl airepl iomorphiquePCNA1 3 %LupusLi e au cycle cellulaireRhumatismeschroniques2dotsCent riolescentrosomeInfectionsviralesLupusSj grenCRESTA vecrenforcement polaireMSA-1 (NUMAI)ConnectivitemixtePolyarthriteOu non sp cifiqueFuseau mitotiqueScl rodermiesyst miqueCorpsinterm diairesMSA-2 (Midbody)RaynaudOu non sp cifiqueGrainsp richromatiniensMSA-3 CancersMaladiesinflammatoires chroniquesTubules du fuseauTubuline (NUMAII)infectieuses, (histidyl-tRNAsynth tase), ouGrainsfinsp rinucl airesPolymyositeautres anti-synth tase(PL7, PL12)CytoplasmiqueGrainsdenses renforcementRibosomes(phosphoprot inesP)Lupus,neurolupusp rinucl aireGrainsfinsisol sSRP (signalrecognitionparticle)

9 PolymyositesAspectdefluorescencesurcellu lesHEp2 Antig nesAssociationscliniquesGrains denses, plus marqu s unR ticulum endoplasmique (P450)H patites m dicamenteusesp leVacuolaire, grainsdetaillesLysosomesRarement lupusdiff rentesMouchet e fine dans tout lePeroxysomesNon sp cifiquecytoplasmeLupusCytoplasmiqueSj grenP rinucl aire, un c t du noyauGolgiRhumatismeschroniquesInfection sviralesSyndromeslymphoprolif ratifsCirrhose biliaireprimitiveR seau granulo-filamenteuxMitochondriesM2 Scl rodermieConnectivitemixteH patiteAItype IFinesfibres en faisceaux,Microfilaments (actine)Syndrome de chevauchementtraversant le cytoplasmeHAI/CBPC ourts c bles entremembranesNon sp cifiqueMicrofilaments (vinculine)nucl aireetplasmiqueMaladiesAIchroniquesNon sp cifiqueR seau complexedefines fibres,Filaments interm diaires (vimentine)HAI, Maladiessyst miques, colites,r ticul etenroul CytosqueletteBeh et, seau renforcementPolyarthriterhumato deFilaments interm diairesp rinucl aireetprolongementsConnectivitemixte(cyt ok ratine)cytoplasmiquesNon sp cifiqueFin treillisDesmine?

10 Fibres tenduesentrenoyau etTropomyosineNon sp cifiquecytoplasmeD apr s:Bradwell AR, Stokes RP,Mead GP. Advanced atlas of autoantibodypatterns. Birmingham :The BindingSite, 1999 ;pp. tenter de pallier ce manquede sensibilit ,il existedes cellulesHEp2 transfect espour le g ne de SSA/Ro(60 kDa) qui surexprimentcet antig ne(Hep2000 ).L aspecten IFI diff re de l aspectSSA/Roclassique:ilest finementmouchet et nucl olairedans 5 15%descellulesqui surexprimentla prot tude amontr que 31,7 %des sujets adultessains(20 60 ans) avaientdes anticorpsantinucl airesau titrede 40, 13,3 % 80 et 5% 160. C est pourquoileseuil de 160 est consid r commesignificatifchezl adulte,mais ce seuil augmenteavec l ge :lapr senced ANAchez le sujet g sain n est pas FLUORESCENCESUR HEP2 Immunofluorescencenucl aire Homog ne Homog ne: aspect :fluorescencediffuseuniformede tout lenoyau l interphase,plus prononc eau niveau deschromosomesdans les cellulesen mitose ( mitosespositives ).