Électrophorèse desprotéinessériques Dansl ...

1 Lectrophor sedesprot iness riquesL lectrophor sedes prot iness riquesest une tech-nique permettantla s parationdes prot inesen frac-tions de mobilit diff rente,avec obtentionde een pratiqueclinique,cette analyserefl te l ensembledes prot iness ed un commentaired interpr ta-tion, elleapportede nombreuxrenseignementsen parti-culier sur l tat inflammatoire,nutritionnel,et permetle d pistageet le suivi d une orientevers les examenscompl mentairesn ces-saires (immunofixationet/ou dosagessp cifiquesdesprot ines,bilan h matologique,explorationr nale oudigestive).Soumises unchamp lectriquesur un supportdonn (ac tatede cellulose,gel d agarose),les prot inessed placent des vitessesdiff rentes,qui r sultentde plu-sieurs facteurs: leur mobilit propre,sous l effet du champ lectriqueet du tampon; l lectroendosmosedu support; le courantd vaporation.

2 La texturedu prot inessont ensuitecolor es(rougeponceau,amidoschwarz)etles fractionssont int gr espar lecturedensitom ann es 1990 s est d velopp el lectropho-r se capillairede zone en solutionlibre (CZE),tech-nique de s paration lectrocin tiqueen capillairesdesilice fondue(diam treinterne20 100 m), remplisd tension lev e provoquela migrationdes prot inesdans le plus, les prot inessont expos es unflux d lectroendosmosecr parla diff rencede potentielentre les chargespositivesdutamponet les chargesn gativesdes parois du capillaire,ce qui produitune s paration haute r solution,lesprot ines tant ensuitequantifi espar mesure leurlongueurd onded absorption(200 nm). Cette tech-nique pr sentebeaucoupd avantages:faible consom-mationd chantillon,efficacit de s paration,etrapidit d s paration lectrophor tiquedes prot inessur geld agarosemet en videncecinq fractionstandis quel lectrophor secapillaireen r v le six, car deux frac-tions sont s par pourcentageset concentra-Guidedes analysessp cialis estions de r f rencechez l adultefigurentdans l lectrophor sedes prot iness riques,chaquefractiondoit tre rapport eau taux de prot iness riques(g/l) pour interpr terles fractionsdu prot inogrammepeut pr sen-ter des la fractionalbumine Bisalbumin mieElle est caract ris epar un d doublementdu pic dontl tiologieest soit une mutationh r ditaire(expressionpermanented un variantde l albuminesans cons -quencepathologiqueobserv e cejour)

3 , soit une ano-malieacquisetransitoire(traitementpa r les -lactamineschez un insuffisantr nal, ou en pr senced une fistule pancr atiqueavec hydrolysede l albuminesous l actiondes enzymespancr atiquesau sein de lafistule). Analbumin mieC est une atteinteexceptionnellecaract ris e l lectro-phor separ la pr senced un tr s petit pic d albumine,contrastantavec une augmentationcompensatricedetoutes les globulinespour assurer la signes cliniquesde l atteintese limitenten g n ral des d mesdiffus. Hypoalbumin mieLa synth sede l albumine tant strictementh patique,sa diminutiond pendde trois m canismes: une synth sediminu epar insuffisanceh pato-cellulaire,malnutritionou inflammation; une perte accrue par fuite digestive,urinaire(syn-drome n phrotique)ou cutan e(br lures); un hypercatabolismedans la thyr otoxicose,le syn-drome de Cushing,ou des syndromestumoraux.

4 Hyperalbumin mieSans cons quencepathologiquechez le sujet sain, elletraduit une h moconcentration,ou bien peut tre li e une perfusiond la fraction 1-globulinesUne diminutionest observ edans : le d ficit cong nitalen 1-antitrypsine,composantmajeurdes 1-globulines;onobserve une iness par essurgeld agaroseetparelectrophor secapillaireFractionProt inesGeld agarose lectrophor secapillaire%g/l*%g/l*AlbumineAlbumine57 65%38 4656 66 %39 47 1-globulines 1-antitrypsine, orosomuco de1 4 %0,8 2,33 5 %2,1 3,5 2-globulinesAntithrombine, c rul oplasmine, 2-macroglobuline,6 10 %5,8 117 12 %5 8,5haptoglobine, -lipoprot ines 1-globulinesH mopexine, transferrine, -lipoprot ines8 12 %6,6 135 7 %3,4 5,2 2-globulinesCompl mentC3, IgA3 7 %2,3 4,7 -globulinesIgG, IgA,IgM, IgD,IgE12 19 %5-1511 19 %8 13,5*Pour un taux de prot iness riquesde70 r een cas de d ficitsh t rozygotes(ph notypePi MZ) ou importanteen cas de d ficits homozygotes(ph notypePi ZZ) ; les d ficitsaigus (insuffisanceh patocellulaire,syn-dromesn phrotiquess v res,d nutrition).

5 Une augmentationdes 1-globulinesse rencontreessentiellementdans les syndromesinflammatoires,enassociationave c une augmentationdes la fraction 2-globulines Un d doublementdes 2-globulin miespeut s obser-ver dans quatre cas : encas d h molysein vitro,l ecomplexeh mo-globine-haptoglobinemigre en 2; pr senced haptoglobinede ph notypediff rentdutype Hp1-2 (le plus courant),les variantsHp1-1 ouHp2-2 ayant une mobilit lectrophor tiquediff -rente. Ce d doublementest plus net par techniqued lectrophor secapillairequ en agarose; pr senced une -lipoprot ine(apo B) de mobilit anormale; pr sencede cha nesl g reslibres d immuno-globulines. La diminutiondes 2-globuliness observeen casd insuffisanceh patocellulaire,de fuite prot iquedigestiveou r nale, de d nutrition,d h molyseintra-vasculaire; L augmentationdes 2-globuliness observedans lessyndromesinflammatoires(par augmentationdel haptoglobine,associ e une hyper- 1-globuli-n mie) et dans les syndromesn phrotiquespar aug-mentationde l 2-macroglobulinequi ne passe pasla barri rer nale en raison de son poids mol la fractionG1-globulines La diminutiondes 1-globuliness observedans lesinsuffisancesh patocellulairess v res,la surchargemartiale,les transfusionsr p t eset les fuites pro-t iques d originedigestiveou r nale.

6 L augmentationdes 1-globuliness observe: dans les hypertransferrin miesdes an miesferri-prives ; enpr senced h moglobinelib r epar h molysein vitro(pr senced un double pic en 1) ; taux lev dans les causes monoclonales(IgA ouIgG monoclonalesdu my lome,IgM monoclonalede la maladiede Waldenstr m,cha nesl g reslibres de type ou des my lomes cha nes l g resou des amyloses).Remarque:certainsproduitsde contrasteiod s(Visipaque ,Omnipaque ,X n tix ,H xabrix ,Iom ron ,Optiject )peuventprovoquerl apparitionpar techniqued lectrophor secapillaired un pic art -factuel entre les 2et 1, en 1ouen 2, en raisonde l absorptionde ces mol cules 200 la fractiondesG2-globulinesUne diminutiondes 2-globulinespeut traduireunehypocompl ment mieC3 (s rum vieilli, consommationdu C3, pr senced un anticorpsanti-C3ou -C3 Nef).

7 Les 2-globulinespeuvent tre augment es: taux mod r sur hypercompl ment mieC3 dans lessyndromesinflammatoiresmassifsou dans les choles-tases biliairesintra- ou extra-h patiques; taux lev , et associ esaux -globulines(bloc - ),dans la cirrhose d doublementou un paulementdans la fraction 2-globulinespeut traduire: la pr senced une prot inemonoclonale(IgA, IgG,cha ne l g re libre, voire une IgM) ; la pr sencede fibrinog ne,dont les causes peuvent tre les suivantes: pr l vementsur tube avec anticoagulant; centrifugationdu tube sec avant coagulationcom-pl te du sang ; traitementhypocoagulantchez le patient ; pr l vementpar cath terp riph riqueou voie cen-trale, avec contaminationh liminercette hypoth se,il est recommand detraiter le pr l vementavec de la thrombine concentra-tion lev e,ce qui fera dispara trele fibrinog ner la fractiondes -globulines La diminutiondes -globulines(< 6g/l) s observedans : l hypogammaglobulin miedu nourrisson(physio-logique); les d ficitsimmunitairesprimitifsisol s ou portantsur les IgA, IgG ou IgM de l enfantou de l adulte; les d ficitssecondaires(traitementimmuno-suppr esseur,cortico des,chimioth rapieou radio-th rapie); lemy lome cha nes l g res,caract ris par uneprot inuriede Bence-Jonestr s importante,et uner pressionde synth sedes IgG, IgA et IgM.

8 L augmentationdes -globulines(> 15 g/l) peut tre : d originepolyclonaledans les pathologiesinfec-tieuses,autoimmunesou h patiques; 1 2 Profilinflammatoire aiguNouabNouaNN chroniqueNouabNouab(maladiesinfectieuses , n oplasiques,allergiques)CirrhoseaNouaNoua SoudureNoubHypoprotid mie profil exsudatifNoubNouaNoua malnutritionaNoubNoubNoubNoubSyndrome n phrotiqueaNouabNoubaHypergammaglobulin mieaNNNbDysglobulin miesmonoclonalesaNPr senced unpic (en zone 2, ou avec les immunoglobulinespolyclonales normales ou diminu es)N=normal ;boua=augmentation ou diminutionrelative. d originemonoclonaledans les gammapathiesmalignes(my lomemultipleou maladiede Kahler,maladiede Waldenstr m),les gammapathiesasso-ci es une leuc mielympho dechroniqueou unlymphome,ou les gammapathiessans significationclinique(MGUS oumonoclonalgammapathyofunderterminedsig nificance).

9 Dans ce contexte,laquantificationde la prot inemonoclonalepar int -gration l lectrophor sefait partie du suivi semes-triel puis annuel d une -globulines,par leur polyclonalit ,ont en tempsnormalune r partitiongaussienne l lectrophor r partitionh t rog ne,oligoclonale,ou une bandede faible intensit peuvent tre rencontr esdans les syn-dromesinfectieux,les pathologiesvirales(h patites,virus herp s,VIH), les pathologiesautoimmunes,lescancers,l amylose,et chez les patientsgreff faut soulignerqu un pic monoclonalou une bandediscr tepeuvent tre observ sm me sans anomaliequantitativedes anomaliede r par-tition doit tre mentionn eau compte-rendude l lec-trophor se,et caract ris epar immunofixationsi lecontextecliniquele n ne faut pas ignorerqu une augmentationde la CRPpeut conduire l observationd une bande fine discr tede migrationgammaglobuliniqueanodique,qui pourra tre associ e une hyper- 1-globulin valeurseuil , partir de laquellela migrationde la CRPdevientvisible,est fonctionde l importancede la frac-tion travauxont estim queces valeursseuils de CRP variaiententre 200 et100 mg/l en cas d hypoglobulin mie(tableau3).

10 Gammapathiesmonoclonales,IgG,Profilsprot iques(Le Carrer D. lectrophor seet immunofixation desprot iness riques. Interpr tationsillustr :Laboratoires SEBIA,1994 ;122 , Cartier B, Couaillac JP,Gibaud C, PoulinG,Rivi re H, LeCarrer de commentaires interpr tatifspr ts l emploi pour l lectro-phor sedesprot iness BiolClin 2006 ;64/4 :367-380.)