PRINCIPIOS Y MÉTODOS DE VALIDACIÓN DE LAS PRUEBAS …

1 NB: Versi n adoptada en la Asamblea Mundial de Delegados de la OIE en mayo de 2009 Manual Acu tico de la OIE 2012 1 Los t rminos v lido (adjetivo) o validez (sustantivo) indican si las estimaciones de las caracter sticas de rendimiento de la prueba est n sesgadas respecto a los verdaderos valores del par metro. Estos t rminos son aplicables con independencia de que la medici n sea cuantitativa o t rminos ensayo, m todo anal tico y prueba son sin nimos a efectos de este cap tulo, y por tanto pueden utilizarse indistintamente. CAP TULO PRINCIPIOS Y M TODOS DE VALIDACI N DE LAS PRUEBAS DE DIAGN STICO DE LAS ENFERMEDADES INFECCIOSAS 1.

2 Introducci n La validaci n es un proceso que determina la idoneidad de una prueba, que se ha desarrollado, optimizado y estandarizado adecuadamente para un fin concreto. La validaci n incluye estimaciones de las caracter sticas de rendimiento anal tico y diagn stico de una prueba. En el contexto de este cap tulo, una prueba que ha superado las tres primeras etapas de la validaci n (v ase la Figura, 1 abajo), incluida la caracterizaci n del rendimiento, puede designarse como validada para el objetivo inicial deseado(s) 1. Pero para que una prueba siga estando validada, es necesario realizar un cuidadoso seguimiento del rendimiento de la misma a diario, a menudo controlando el comportamiento de los controles internos a lo largo del tiempo.

3 Esto garantiza que la prueba, seg n la validaci n original, mantenga siempre sus caracter sticas de rendimiento. En el caso de que empiece a dar resultados que no concuerden con los datos de la validaci n original, la prueba podr a no ajustarse al fin deseado. As , una prueba validada se eval a continuamente para garantizar que mantiene su idoneidad para el fin deseado, mediante una evaluaci n de los resultados de los controles internos cada vez que se lleva a cabo. Las PRUEBAS realizadas en individuos o en poblaciones tienen varios prop sitos, tales como: documentar la ausencia de una determinada enfermedad en un pa s o regi n, evitar su propagaci n a trav s del comercio, erradicar una infecci n de una zona o pa s, confirmar el diagn stico de los casos cl nicos, estimar la prevalencia de una infecci n para facilitar el an lisis del riesgo, identificar a los animales infectados con vistas a implementar medidas de control, y clasificar los animales seg n su salud o estado inmunitario tras la vacunaci n.

4 Una nica prueba puede validarse para uno o varios fines deseados optimizando sus caracter sticas de rendimiento para cada uno, como por ejemplo fijando una alta sensibilidad diagn stica (Dse), asociada a una baja especificidad diagn stica(DSp) para una prueba de cribado, o por el contrario, fijando una DSp alta asociada a una DSe m s baja para una prueba confirmativa. El siempre cambiante repertorio de nuevos y espec ficos reactivos de diagn stico, junto con la existencia de muchos nuevos formatos y protocolos anal ticos ha dado lugar a debates sobre c mo validar adecuadamente estas PRUEBAS .

5 Para orientar a los usuarios de PRUEBAS en cuanto a la validaci n de PRUEBAS m s complejas, como las de detecci n de cido nucleico, ya no basta con ofrecer simples ejemplos de PRUEBAS serol gicas, como el enzimoinmunoan lisis. Con el fin de aportar coherencia al proceso de validaci n para todos los tipos de PRUEBAS , este cap tulo se centra en los criterios que deben cumplirse durante la realizaci n y la validaci n de PRUEBAS de cualquier tipo. La inclusi n de la ejecuci n de la prueba como parte del proceso de validaci n de la misma puede parecer contra-intuitiva, pero en realidad, tres de los criterios de validaci n que deben evaluarse para llegar a la validaci n de una prueba incluyen pasos de su proceso de ejecuci n.

6 Seg n esto, el proceso de ejecuci n de la prueba da lugar a un sistema de validaci n de la misma, y ambos contienen criterios de validaci n que deben cumplirse. Este cap tulo tambi n aporta orientaci n sobre la evaluaci n de cada criterio indicando las mejores pr cticas cient ficas, que se especifican en los anexos. Dichas pr cticas se adaptan a cada uno de los distintos tipos de prueba (como la detecci n de cido nucleico, anticuerpos o ant genos). 1 La validaci n no necesariamente implica que el rendimiento de la prueba cumpla alg n valor m nimo o que la prueba tenga un rendimiento comparable a cualquier otra prueba parecida, a no ser que se haya tenido en cuenta espec ficamente en el dise o del estudio de evaluaci n de la prueba.

7 Cap tulo PRINCIPIOS y m todos de validaci n de las PRUEBAS de diagn stico de las enfermedades infecciosas 2 Manual Acu tico de la OIE 2012 Criterio de validaci n de la prueba: un rasgo caracter stico de una prueba; un factor, medida o est ndar decisivos en los que pueda basarse una opini n o decisi n. 2. M todos directos e indirectos que requieren validaci n El diagn stico de enfermedades infecciosas se lleva a cabo mediante la detecci n directa y/o indirecta de agentes infecciosos. Los m todos directos permiten la detecci n de las part culas de los agentes y/o sus componentes, como cidos nucleicos, prote nas estructurales o no estructurales, enzimas, etc.

8 Los m todos indirectos ponen de manifiesto respuestas inmunitarias humorales o celulares mediante exposici n a agentes infecciosos o a sus componentes. Los m todos indirectos utilizados con m s frecuencia en la detecci n de agentes infecciosos son las PRUEBAS serol gicas, tales como la neutralizaci n v rica cl sica, el enzimoinmunoan lisis (ELISA), la inhibici n de la hemaglutinaci n, la fijaci n del complemento y m todos m s novedosos, como los biosensores, la bioluminometr a, la polarizaci n de la fluorescencia o la quimioluminiscencia.

9 Los m todos m s frecuentes de detecci n directa son el aislamiento o el cultivo in vitro de microorganismos viables, la microscop a electr nica, la inmunofluorescencia, la inmunohistoqu mica, el ELISA para ant genos, la inmunoelectrotransferencia y los sistemas de detecci n de cido nucleico (DAN). Los sistemas DAN incluyen la hibridaci n de cido nucleico (NAH), los macro- y micromatrices y las diversas t cnicas de amplificaci n del cido nucleico, como la reacci n en cadena de la polimerasa (PCR), o los m todos de amplificaci n isot rmica, como la amplificaci n basada en la secuencia del cido nucleico (NASBA), y la amplificaci n isot rmica invasora o mediada por bucle (LAMP).

10 Las PRUEBAS de DAN son cada vez m s corrientes y en muchos casos sustituyen el aislamiento del virus y el cultivo de bacterias, en concreto para la detecci n de agentes cuyo cultivo es dif cil o imposible. Las herramientas de DAN tambi n se utilizan como un medio secundario para la identificaci n muy espec fica de cepas, grupos o linajes de microorganismos despu s del aislamiento o el cultivo de virus, bacterias y par sitos. El diagn stico molecular, como la PCR, no requiere: a) la presencia de organismos replicantes, b) una infraestructura costosa de aislamiento v rico, c) hasta varias semanas para lograr un diagn stico, ni d) conocimientos especiales, de los que a menudo no se dispone en muchos laboratorios; todas son ventajas pr cticas.