5.4. Metodi di prova e validazione - Accredia

1 Metodi di prova e validazione Scelta dei Metodi (preferibilmente normati) Metodi interni:definizione dei requisiti (ISO78/2) validazione dei Metodi Incertezza di misura - necessaria ancheper i laboratori di prova , eventualmentecon procedure semplificate. Controllo dei dati e del softwareScelta dei metodiIl Laboratorio deve, ove possibile, utilizzare metodie procedure di prova definiti da Norme, RegoleTecniche o Metodi ufficiali in accettati i progetti di Norma (ISO FDIS, prEN,prENV, ecc.), solo nella forma sottoposta al SINAL non riconosce come Metodi normati articolipubblicati su riviste o istruzioni dei fornitori delleapparecchiature: in tali casi il laboratoriorichieder l'accreditamento mediante l'emissionedi un metodo dei metodiKIT: certificati (es. validazione AFNOR, AOAC)sono accettabili - deve essere anche accreditatoil corrispondente metodo normato (alcuni kitsostituiscono solo parte del metodo, per esempioSalmonella Vidas; inoltre se scade la validazionenon si possono pi usare).

2 Norme superate o progetti di norma sono accettatise ad essi fanno riferimento la normativa cogenteo le norme per la certificazione di dei alle necessit del clienteE bene sottolineare come le incertezze analitichedebbano essere compatibili con lo scopo percui il dato prodotto e non necessariamente lepi basse tecnicamente raggiungibili in un otticadi sostenibilit dei UNICHIM 197 Il laboratorio deve usare procedure scritte comespecificato in EN 15259. I Metodi utilizzati devono fare riferimento anormativa primaria (Direttive) o normativaaccettata dalla direttiva IPPC. Se indicato un metodo, non ammessomodificarlo o usarne uno 15675:2007 - Emissioni da sorgente stazionariaIdentificazione delle prove (PT-0002) Evitare di indicare determinazione Indicare il materiale/prodotto corretto riportato nelcampo di applicazione del metodo. Un metodo dovrebbe comparire una sola volta.

3 Riportare dettagli delle propriet determinate ( generico Pesticidi, ma anche i singoli principiattivi ricercati, lo stesso vale per Metalli, ecc.) Alcuni Metodi ufficiali non contengonosufficienti E necessario indicareanche Metodi di prova normati o interni. Prestare attenzione all aggiornamento normativo. identificazione appropriata; scopo; descrizione del tipo di oggetto da provare o tarare; parametri o grandezze e campi di misura da determinare; attrezzature e apparecchiature, compresi i requisiti tecnici diprestazione; campioni di riferimento e materiali di riferimento richiesti; condizioni ambientali e periodo di stabilizzazione richiesto; descrizione della procedura, comprendente: apposizione di marchidi identificazione, manipolazione, trasporto, immagazzinamento epreparazione degli oggetti da provare; verifiche da effettuare primadi iniziare le attivit : verifiche del buon funzionamentodell'apparecchiatura e, se richiesto, taratura e messa a punto primadell'utilizzo; Metodi di registrazione delle osservazioni e dei risultati;tutte le misure di sicurezza da osservare; criteri e/o requisiti per l'approvazione / rifiuto; dati da registrare e i Metodi di analisi e di presentazione.

4 Incertezza o le procedure di stima dell' dei Metodi validazione Quando necessario impiegare Metodi di prova oprocedure non normalizzate, esse devono esserecompletamente documentate. (UNI CEI EN 45001 , ) I Metodi di prova interni devono riportare i riferimentibibliografici dei documenti utilizzati per la loroelaborazione. I risultati di eventuali provecomparative eseguite con Metodi analoghi nell'ambitodel Laboratorio, o di circuiti interlaboratorio, nonch tutta la documentazione ritenuta utile perdimostrare la validit del metodo deve esseredisponibile e regolarmente archiviata. Il Laboratoriodeve determinare la ripetibilit dei Metodi di provainterni, conservandone adeguata documentazione.(SINAL DG-0007 , ). validazione Conferma, sostenuta da evidenze oggettive, che irequisiti relativi ad una specifica utilizzazione oapplicazione prevista sono stati soddisfatti.

5 (UNI ENISO 9000:2000). uso di materiali di riferimento certificati confronto con altri Metodi confronti interlaboratorio verifica dei contributi all incertezza di misura, etc. richiesto il riesame periodico della validazione deimetodi. Il Responsabile deve firmare la dichiarazione circal idoneit del metodo per lo scopo ValidazioneIl laboratorio deve validare i Metodi non normati, imetodi sviluppati/progettati dal laboratorio, i Metodi normatiutilizzati al di fuori del proprio campo di applicazioneprefissato, come pure estensioni e modifiche di metodinormati per confermare che i Metodi siano adatti all'impiegoprevisto. La validazione deve essere estesa in modo dasoddisfare le esigenze di una data applicazione o di un campodi laboratorio deve registrare i risultati ottenuti, leprocedure utilizzate per la validazione , cos pure unadichiarazione circa l'idoneit del metodo per l'utilizzoprevisto.

6 (ISO/IEC 17025, )ValidazioneDovranno essere definiti: i criteri di accettabilit della validazione ( dei risultati ottenuti con quelli riportatinel certificato di un materiale di riferimento, o con icriteri di accettabilit dell organizzatore di un circuitointerlaboratorio, o con i risultati di un metodo diriferimento). I parametri del metodo da determinare, e su quantilivelli. Alcuni criteri sono suggeriti o richiesti dalla normativaelencata nelle prossime dei Metodi Federal Register: March 1, 1995, page 11259-11262.( ). Contiene termini edefinizioni relativi alla validazione (US FDA) Federal Register: March 7, 1996, page 9315-9319. InternationalConference on Harmonisation; Draft Guidelines on the Validation afAnalytical Procedures. ISO 78-2 (1999) Chemistry Layout for standards Part 2:Methods of chemical analysis. EURACHEM The fitness for Purpose of Analytical Methods, 1998 . NF V03-110:1998.

7 Proc dure de validation intralaboratoire d'unem thode alternative par rapport une m thode de r f rence. NORDVAL Protocol for the validation of alternative microbiologicalmethods NATA, Format and Content of Test Methods and Procedures forValidation and Verification of Chemical Test Methods. Documenti guida e corsi LGC e VAM. Linee Guida per la validazione dei Metodi analitici e per il calcolodell incertezza di misura - ARPA Emilia Romagna. UNI EN ISO 16140:2005. Microbiologia di alimenti e mangimi peranimali - Protocollo per la validazione di Metodi - grado di validazioneType of analyticalprocedure;characteristicsIdent ificationImpuritiesQuantitationImpuritie sLimitAssay;dissolution,content/potencyA ccuracy + +PrecisionRepeatability + +IntermediatePrecision + +Specificity++++Detection Limit + Quantitation Limit + Linearity + +Range + +Manca la robustezza, che deve comunque essere tenuta in considerazioneRobustezza La robustezza di una procedura analitica la sua capacit dinon essere influenzata da piccole, ma deliberate, variazioni neiparametri del metodo, e fornisce una indicazione della suaaffidabilit durante l impiego normale.

8 La valutazione della robustezza dovrebbe essere considerata infase di sviluppo e dipende dal tipo di metodo in dimostrare l affidabilit dei risultati rispetto adeliberate variazioni dei parametri del metodo. Se i risultati sonosuscettibili a variazioni delle condizioni analitiche, questedovranno essere controllate in modo idoneo, oppure deveessere inclusa una dichiarazione precauzionale nella procedura. Utilizzo del DOECOM(2003) 52 definitivo - proposta di regolamento 5-02-2003a) esattezza;b) applicabilit (matrice e gamma di concentrazione);c) limite di rilevazione;d) limite di determinazione;e) precisione; ripetibilit intralaboratorio (nell ambito di un laboratorio),riproducibilit intralaboratorio (in un laboratorio e tra laboratori)risultante da dati provenienti da prove condotte in collaborazione e,laddove siano stati stabiliti criteri di rendimento per i metodianalitici, prove di conformit ai criteri piuttosto che considerazionisull incertezza delle misurazioni;f) recupero;g) selettivit ;h) sensibilit ;i) linearit.

9 J) altri criteri a caso in cui i Metodi di analisi possono essereconvalidati soltanto nell ambito di un singololaboratorio, essi devono essere convalidaticonformemente alle Harmonised Guidelinesdell IUPAC ovvero, se siano stati fissati criteri direndimento per i Metodi analitici, sulla base diprove di conformit a Metodi di analisi adottati ai sensi del presenteregolamento vanno enunciati secondo lapresentazione standard raccomandatadall'Organizzazione internazionale dinormalizzazione (sarebbe la ISO 78-2).93/256/CEE: Decisione della Commissione, del 14 aprile1993, che stabilisce i Metodi da impiegare per la ricerca diresidui di sostanze ad azione ormonica e di sostanze adazione tireostatica. Bianco del campione, bianco dei reattivi Specificit Accuratezza Ripetibilit , riproducibilit . Limite di rivelazione, limite di determinazione Sensibilit (pendenza della retta di taratura) Praticabilit (velocit , costi), applicabilit Interpretazione dei risultati Sensibilit alle interferenze Tecniche di conferma (co-cromatografia, GC-MS, ecc.

10 ABROGATAD ecisione della Commissione 12agosto 2002 (2002/657) che attua ladirettiva 96/23/CE del Consigliorelativa al rendimento dei metodianalitici e all interpretazione CEE L221 pag. 8leggere il testo in ingleseGli Stati membri garantiscono che i campioni ufficialiprelevati a norma della direttiva 96/23/CE sianoanalizzati con l'impiego di Metodi che:a) sono documentati nelle istruzioni dell'analisi,preferibilmente in ottemperanza alla ISO 78-2;b) rispettano la parte 2 dell'allegato alla presentedecisione;c) sono stati convalidati in ossequio alla proceduredescritte nella parte 3 dell'allegato;d) rispettano i pertinenti limiti minimi di rendimentorichiesti (LMRR) da stabilire in ossequio all'articolo 4. Recupero Il recupero deve essere determinato perciascun lotto di campioni. Specificit Un metodo deve distinguere tra l analita e lealtre sostanze presenti, e deve esserefornita una stima di come sia possibileattuarlo, investigando omologhi, analoghi,metaboliti.