BD Tryptic Soy Broth (TSB)

1 INSTRUCCIONES DE USO MEDIOS EN FRASCOS LISTOS PARA USAR Rev.: Febr. 2008 - 1 - BD Tryptic Soy Broth (TSB) USO PREVISTO BD Tryptic Soy Broth (medio de digerido de soja y case na) es un medio l quido para enriquecimiento de uso general utilizado en procedimientos cualitativos para la prueba de esterilidad y para el enriquecimiento y cultivo de microorganismos aerobios no exigentes en exceso. En la microbiolog a cl nica, puede utilizarse para la suspensi n, el enriquecimiento y el cultivo de cepas aisladas en otros medios. PRINCIPIOS Y EXPLICACION DEL PROCEDIMIENTO M todo microbiol gico.

2 Tryptic Soy Broth (TSB) es un medio nutritivo que favorece el crecimiento de una amplia variedad de microorganismos, en especial las bacterias anaerobias facultativas y aerobias comunes1,2. Debido a su capacidad para favorecer el crecimiento, esta f rmula fue adoptada por la Farmacopea de Estados Unidos (USP) y la Farmacopea Europea (EP) como medio de prueba de esterilidad3,4. En microbiolog a cl nica, el medio se utiliza en diversos procedimientos, por ej., para la preparaci n del in culo y para suspender cepas para el an lisis de sensibilidad por difusi n en disco Kirby-Bauer, adem s de para el procedimiento de pruebas microbiol gicas de medios de cultivo conforme a las normas de NCCLS5,6.

3 No obstante, el caldo de soja tr ptica sin suplementar no se recomienda como medio de enriquecimiento primario inoculado directamente con la muestra cl nica. En BD Tryptic Soy Broth , los digeridos enzim ticos de case na y harina de soja proporcionan amino cidos y otras sustancias nitrogenadas complejas. La glucosa (dextrosa) es una fuente de energ a. El cloruro s dico mantiene el equilibrio osm tico. El fosfato pot sico dib sico act a como tamp n para controlar el pH. REACTIVOS BD Tryptic Soy Broth F rmula** por litro de agua purificada Bacto Tryptone (digerido pancre tico de case na) 17,0 g Bacto Soytone (digerido p ptico de harina de soja) 3,0 Glucosa (dextrosa) 2,5 Cloruro s dico 5,0 Fosfato dipot sico de hidr geno 2,5 pH 7,3 0,2 ** Ajustada y/o enriquecida para satisfacer los criterios de rendimiento.

4 PRECAUCIONES . Solamente para uso profesional. No utilizar los recipientes si muestran evidencia de contaminaci n microbiana, decoloraci n, deshidrataci n, grietas o cualquier otro signo de deterioro. Consultar los procedimientos de manipulaci n as ptica, riesgos biol gicos y desecho del producto usado en el documento INSTRUCCIONES GENERALES DE USO. ALMACENAMIENTO Y VIDA UTIL Al recibir los frascos, almacenarlos en un lugar oscuro a 5 25 C hasta momento antes de su utilizaci n. Evitar la congelaci n y el sobrecalentamiento. Los frascos pueden inocularse hasta la fecha de caducidad (v ase la etiqueta del envase) e incubarse durante los per odos de incubaci n recomendados.

5 Los frascos de envases abiertos pueden utilizarse hasta la fecha de caducidad. Los frascos abiertos deben utilizarse de inmediato. - 2 - CONTROL DE CALIDAD DEL USUARIO Inocular muestras representativas con las cepas siguientes (para obtener los detalles, v ase el documento INSTRUCCIONES GENERALES DE USO). Seg n la Farmacopea Europea, incubar los recipientes inoculados con cepas bacterianas a 30 35 C durante un m ximo de 3 d as y a 22,5 2,5 C en el caso de los hongos, durante un m ximo de 5 d as, en aire normal. Para proporcionar una aireaci n suficiente, los recipientes deben ventilarse durante la incubaci n (v ase Procedimiento de an lisis).

6 Cepa de prueba Resultados de crecimiento esperados (turbidez)* Staphylococcus aureus ATCC 6538 +++ o m s Bacillus subtilis ATCC 6633 +++ o m s Pseudomonas aeruginosa ATCC 9027 +++ o m s Candida albicans ATCC 10231 +++ o m s Aspergillus niger ATCC 16404 +++** o m s Sin inocular Ambar claro a mediano, transparente, sin precipitaci n * ++++ = opaco, denso +++ = opalescente, denso ++ = opalescente + = leve crecimiento **Aspergillus niger y otros hongos filamentosos pueden producir micelio sobre el caldo o motas en el caldo antes que turbiedad homog nea. PROCEDIMIENTO Materiales suministrados BD Tryptic Soy Broth (TSB), suministrados en frascos (v ase los detalles en ENVASE Y DISPONIBILIDAD).

7 Materiales no suministrados Medios de cultivo auxiliar, reactivos y el equipo de laboratorio que se requiera. Tipos de muestras Este medio no debe utilizarse para la inoculaci n con muestras cl nicas. Se debe utilizar s lo en ciertos procedimientos (v ase PRINCIPIOS Y EXPLICACION DEL PROCEDIMIENTO y CARACTERISTICAS DEL RENDIMIENTO Y LIMITACIONES DEL PROCEDIMIENTO). Consultar las aplicaciones en microbiolog a industrial en las referencias1,3,4. Procedimiento de an lisis Para aplicaci n en microbiolog a industrial, inocular el medio con la cepa e incubar seg n se requiera. Tener en cuenta que las muestras tambi n deben inocularse directamente en medios s lidos, tales como BD Columbia Agar with 5% Sheep Blood o BD Trypticase Soy Agar II with 5% Sheep Blood y, finalmente, en medios selectivos y no selectivos adicionales.

8 Por lo general, una temperatura de incubaci n de 35 2 C es adecuada. Incubar durante 18 24 h o m s si es necesario. Para uso como medio se suspensi n, inocular el tubo con una peque a cantidad de crecimiento de un cultivo del d a anterior en un medio s lido. Para uso en microbiolog a industrial, inocular la muestra o el material a analizar en el medio. V anse los detalles en las referencias3,4. Seg n la Farmacopea Europea, incubar en atm sfera aerobia a 32,5 2,5 C durante un m ximo de 3 d as (para bacterias) y a 22,5 2,5 C durante un m ximo de 5 d as (para hongos). Para su uso en pruebas de esterilidad, consultar los detalles de procedimiento y especificaciones de USP o EP relativos al volumen del medio con respecto al tama o del recipiente3,4.

9 Para todas las aplicaciones, es importante proporcionar aireaci n suficiente durante la incubaci n. Por tanto, los recipientes con este medio deben ventilarse. Seg n el tipo de cierre del recipiente, se puede ventilar aflojando un poco la tapa o introduciendo una aguja de jeringa est ril tapada con algod n est ril en la membrana del tap n. Tambi n se pueden utilizar agujas de inyecci n con filtro de membrana. Resultados - 3 - El crecimiento en medios de caldo se indica por la aparici n de turbidez, motas o floculaci n en el medio, mientras que el control sin inocular permanece transparente y sin turbidez despu s de la inoculaci n.

10 Si el material analizado causa turbidez del medio, se deben realizar subcultivos en medios s lidos apropiados despu s de la incubaci n para decidir si la turbidez se debe al material solamente o a los microorganismos que se han multiplicado en el caldo. Se requieren subcultivos en medios s lidos adecuados, adem s de pruebas bioqu micas y al microscopio para determinar la pureza del cultivo y para la identificaci n de los organismos aislados. Si se utiliza para el aislamiento de pat genos a partir de muestras cl nicas, realizar un subcultivo de 10 50 L del medio en BD Columbia Agar with 5% Sheep Blood o BD Trypticase Soy Agar II with 5% Sheep Blood.