Cromatografía - Universidad de Guanajuato

1 Cromatograf a La cromatograf a es una t cnica de separaci n extraordinariamente vers til que presenta distintas variantes. En toda separaci n cromatogr fica hay dos fases (s lida, l quida o gas) una m vil y otra estacionaria, que se mueven una con respecto de la otra manteniendo un contacto ntimo. La muestra se introduce en la fase m vil y los componentes de la muestra se distribuyen entre la fase estacionaria y la m vil. Los componentes de la mezcla a separar invierten un tiempo diferente en recorrer cada una de las fases, con lo que se produce la separaci n. Si un componente est la mayor parte del tiempo en la fase m vil el producto se mueve r pidamente, mientras que si se encuentra la mayor parte en la fase estacionaria, el producto queda retenido y su salida es mucho m s lenta. tipo fase estacionaria fase movil l quido-s lido s lido inerte como gel de s lice o al mina disolventes intercambio i nico resina cambiadora soluciones acuosas l quido-l quido l quido adsorbido en un soporte s lido l quido gas-l quido pel cula de l quido adsorbida sobre un soporte s lido gas La m s utilizada en qu mica org nica es cromatograf a l quido-s lido en sus dos variantes: cromatograf a en columna (CC) y cromatograf a de capa fina (TLC) Cromatograf a l quido-s lido (columna) Se emplea para la separaci n de mezclas o purificaci n de sustancias a escala preparativa.

2 Como fase estacionaria se usa, generalmente, al mina (Al2O3) dentro de una columna como las que se pueden ver en la figuras. La elecci n del disolvente es crucial para una buena separaci n. Dicho disolvente pasa a trav s de la columna por efecto de la gravedad o bien por aplicaci n de presi n (cromatograf a flash). La columna se prepara mezclando el soporte con disolvente y se rellena la columna poniendo en el fondo de sta un poco de algod n o lana de vidrio, para evitar que la s lica (SiO2) o la al mina queden retenidas en la columna y del disolvente se enrasada hasta el nivel del soporte. A continuaci n se introduce la muestra por la parte superior de la columna y se eluye con el disolvente elegido, recogi ndose por lo general en tubos de ensayo El orden aproximado de eluci n de compuestos es aproximadamente el que se indica y la polaridad de los disolventes se recoge en el gr fico de la izquierda Cromatograf a l quido-s lido (capa fina) La t cnica de cromatograf a en capa fina (TLC) es una de las m s comunes empleadas en un laboratorio de Qu mica Org nica.

3 Entre oras cosas permite: *Determinar el grado de pureza de un compuesto *Comparar muestras *Realizar el seguimiento de una reacci n *Controlar el contenido de las fracciones obtenidas en cromatograf a de columna La cromatograf a en capa fina usa como fase estacionaria un s lido como gel de s lice a al mina conteniendo alg n material que hace que se mantenga la fase estacionaria sobre un soporte tal y como placas de vidrio, aluminio e incluso materiales pl sticos. Las placas pueden prepararse en el laboratorio o adquirirse en el mercado. Para realizar una cromatograf a en columna se procede de la siguiente manera: 1) Preparar o cortar, en su caso, una placa de tama o adecuado. 2) Disolver una peque a cantidad de la muestra y, mediante un capilar de vidrio, pinchar en la parte inferior de la placa a cierta distancia del borde. 3) Introducir la placa en un recipiente con el disolvente adecuado. Dicho recipiente debe presentar una atm sfera saturada en el vapor del disolvente por lo que se pone trozo de papel de filtro en la parte posterior y disponer de un sistema de cierre.

4 4. Cerrar el recipiente y dejar que el l quido ascienda por capilaridad. 5) Revelar la placa para poner de manifiesto donde se encuentran los puntos. 6) Determinar las posiciones relativas de los puntos mediante el c lculo del Rf