CROMATOGRAFIA EN CAPA FINA - Inicio

1 30/01/2017 1 CROMATOGRAFIA EN CAPA FINA DEFINICI N La cromatograf a en capa fina es la t cnica de separaci n e identificaci n de sustancias qu micas mediante un disolvente que se mueve sobre un soporte solid adsorbente. 1. METODO ASCENDENTE: el eluyente asciende por capilaridad una placa casi en vertical. 2. METODO DESCENDENTE: el eluyente desciende por gravedad y capilaridad desde un recipiente una placa casi en vertical. VENTAJAS An lisis qu mico de materias org nicas complejas Separaci n e identificaci n de compuestos o mezclas Identificaci n en cantidades del orden en microgramos No se requieren cantidades grandes de muestra Sencillon, barato y con una pureza alta El tiempo que se necesita para conseguir las separaciones es mucho menor y la separaci n es generalmente mejor Resultados son f cilmente reproducibles En la preparaci n de las placas tambi n se pueden adicionar indicadores fluorescentes o aglomerantes DESVENTAJAS Las propiedades de la fase estacionaria pueden alterarse mediante la adici n disoluciones tamponadoras para mantener el pH deseado CARACTERISTICAS FASE ESTACIONARIA S lido muy poroso polar El tama o de las part culas del adsorbente: cuanto m s finamente dividido est mayor ser su adhesi n al soporte Se puede a adir un adherente (yeso.)

2 ADSORBENTES Componentes polifuncionales (Plantas y animales) Celulosa Almid n Az cares Carb n activo (carb n en polvo) Kieselguhr (tierra de diatomeas Silica: Si) Tipo de muestra Componentes neutros o ligeramente b sicos o lip filos (no susceptibles a la acidez: Esteroides, cidos grasos, ceras vitaminas liposolubles) Gel de S lice (polar) (pH 4-5) 10-40 mm agente aglomerante: CaSO4 Revelantes: Amarillo y Verde 30/01/2017 2 ADSORBENTES componentes polares (retiene con mayor avidez los componentes polares) Al mina u Oxido de aluminio (Ligeramente b sico y polar) (pH 7-8) aglomerante: Hidr xido de aluminio Revelantes: AgNO3 Tipo de muestra Tipos de interacciones Interacciones Fuertes Interacciones D biles CARACTERISTICAS FASE MOVIL Generalmente menos polar que la fase estacionaria Los componentes que se desplacen con mayor velocidad ser n los menos polares. Eluyentes polares rompen mejor las uniones muestra-fase estacionaria Eluyentes no polares no rompen las uniones muestra-fase estacionaria ELUYENYES POLARES (ARRASTRE RAPIDO) ELUYENYES NO POLARES (ARRASTRE LENTO) Tipos de interacciones Principales Eluyentes ter de petr leo ter diet lico Ciclohexano Acetato de etilo Tetracloruro de carbono Piridina Benceno Etanol Cloroformo Metanol Diclorometano Agua cido ac tico ORDEN DE POLARIDAD (SERIE ELUTROPICA) hidrocarburos < olefinas < fluor < cloro < nitro < aldeh do< ester < alcohol < cetonas < aminas < cidos < amidas<H2O PARA PORDER CONSEGUIR LA ELUSION ( mezclas ) HEXANO: ACETATO DE ETILO (100:1) HEXANO: ACETATO DE ETILO (20:1) HEXANO: ACETATO DE ETILO (10:1) HEXANO: ACETATO DE ETILO (1.)

3 1) Serie Elutropica Mayor poder de elusi n M TODO Efect a la dispersi n del adsorbente (dos partes de agua y una de adsorbentes) Aplicar con un dispoisitivo una capa uniforme de un adsorbente (fase estacionaria sobre una placa de vidrio u otro soporte) . La placa debe quedar libre de grumos y rugosidades (extensores) Un dispositivo que mantenga las placas durante la extensi n Una c mara en la que se desarrollen las placas cubiertas. Pueden usarse reveladores corrosivos (difiere en papel y en columna) Es preciso tambi n poder guardar con facilidad las placas preparadas y una estufa para activarlas. 30/01/2017 3 METODO El espesor del adsorbente mm para separaciones anal ticas. mm para separaciones preparativas. Dejar reposar las placas Activar el agente adsorbente: Incubar 30-60 minutos a 105-110 C (las placas de celulosa no deben calentarse m s de 10 minutos a 105 C). Enfriar para evitar los agrietamientos Aplicaci n de las muestras Disolver la muestra en un disolvente org nico no polar (P eb bajo).

4 En solventes polares (cloroformo:metanol (1:1) Aplicar con micropipetas y microjeringuillas o tubos capilares. El punto de aplicaci n de la muestra se denomina toque al borde inferior Deja secar para evaporar el disolvente El eluyente se introduce en la c mara una hora antes para saturaci n de la atm sfera El tiempo de desarrollo cualitativo, por lo general, no llega a los 30 min. En una cromatograf a preparativa puede llegar a un par de horas. La mejor posici n de desarrollo para un componente es el punto medio entre el origen y el frente del eluyente, ya que permite separar las impurezas que se desplazan con mayor y menor velocidad. El frente del eluyente nunca debe llegar a tocar el borde de la placa. REVELADO Si los compuestos separados no son coloreados METODOS QUIMICOS: una reacci n qu mica entre un reactivo revelador y los componentes separados Yodo: complejo amarillo-marr n (temporal) cido sulf rico: complejos org nicos (manchas negras relacionadas con la cantidad del componente 2,4 - dinitrofenilhidracina (para aldehidos y cetonas) (base de Shift) Verde de bromocresol (para cidos carbox licos) Paradimetil aminobenzaldehido (para aminas) Ninhidrina (para amino cidos) METODOS FISICOS.))

5 A adir un adsorbente un indicador fluorescente Ultravioleta PARAMETROS RF (Ratio o Font) y RX Es la posici n de un compuesto sobre una placa como una fracci n decimal Mide la retenci n de un componente. La distancia recorrida se mide desde el centro de la mancha. El m ximo valor de RF = 1, (ideal es un RF entre y ) El Rx es la razon de la distancia recorrida entre la sustancia problema y el compuesto de referencia A B A+B XA XB Y YXRXFBAXXXRI nfluencia de la Estructura de los compuestos en el RF Compuestos muy polares: Interaccionan fuertemente con la fase estacionaria Corren poco RF peque o Compuestos poco polares Interaccionan d bilmente con la fase estacionaria Corren mucho RF grande Recomendaciones de la CCF No utilizar mezclas de eluyentes (reproducibilidad). No utilizar compuestos muy vol tiles. Evitar que contengan trazas de metales (catalizadores). Hay que estudiar la polaridad del componente y probar con eluyentes cada vez menos polares. Al aplicar en primer lugar eluyentes poco polares, podemos seguir utilizando la misma placa para aplicar otros eluyentes m s polares, hasta dar con el m s apropiado.

6 Saturaci n posible de la atm sfera de la c mara, las paredes se tapizan con papel impregnado del eluyente. A veces pueden obtenerse separaciones mejores sin poner papeles en las paredes, cosa que no debe olvidarse. 30/01/2017 4 Si dos compuestos son iguales, se colocan ambos sobre la misma placa y se desarrolla con varios eluyentes. Si los Rf son distintos, puede deducirse con toda seguridad que no se trataba del mismo compuesto. Si los Rf son iguales los compuestos pueden ser iguales o no serlo. Si el Rf se eluyen sobre la misma placa con el mismo eluyente u otros de menor polaridad, hasta apreciar una separaci n m nima. No usar reveladores qu micos porque alterar an los compuestos UV Recomendaciones de la CCF