DIAGNOSTICO DE ANEMIA INFECCIOSA EQUINA …

1 DIAGNOSTICO DE ANEMIA INFECCIOSA EQUINA MEDIANTE EL LABORATORIOMic. Cristina Montalvo Directora 2010 LIVEXLAB obtiene una designaci n como Organismo de la Evaluaci n de la Conformidad para realizar los ensayos de AIE y BRUCELOSIS otorgado por el CONCAL (Consejo Nacional de la Calidad) luego de una Evaluaci n de la OAE (Organismo de Acreditaci n Ecuatoriano) ANEMIA INFECCIOSA EQUINA (Coggins) BRUCELOSIS(Rosa de bengala)(Elisa competitivo)TECNICAS DE DIAGNOSTICO PARA AIE Pruebas de inmunodifusi n en gel de agar (AGID) (prueba prescrita para el comercio internacional) Coggins2.

2 ENZIMA INMUNO ENSAYO (ELISA)Prueba de inmunodifusi n en gel de agar (AGID) COGGINS Los anticuerpos precipitantes se producen como resultado de la infecci n por la AIE y se pueden detectar mediante la prueba AGID. Las t cnicas AGID disponibles en el mercado utilizan como ant geno la prote na p 26 del core del virus altamente purificada para evitar cualquier reacci n con ant genos proteicos no relevantes y evitar reacciones inespec ficas. VIRUS DE LA ANEMIA INFECCIOSSA EQUINA FAMILIA RETROVIRIDAE SUBFAMILIA LENTIVIRIDAEREACCION OBTENIDA EN COGGINS Las reacciones espec ficas se indican por las l neas deprecipitaci n entre el ant genode la AIE y el suero problema en Un gel de agar a base de unaSolucion de agar noble en unBuffer borato Ph POSITIVOMUESTRA y se confirman por ser id nticas a la reacci n que se da entre el ant geno y el suero controlpositivo.

3 La lectura se debe realizar de 48 a 72 OBTENIDA EN COGGINSCLASES DE REACCIONES REPORTADAS EN LA PRUEBA DE COGGINS (AGID)NEGATIVOC uando las l neas de precipitaci n del control positivo o suero de referencia continuan hacia el pocillo de la muestra sin evidenciar ning n tipo de curvaturaCONTROL POSITIVOMUESTRASPOSITIVA Las l neas del control positivo o suero de referencia se unen con la l nea de la prueba formando una l nea POSITIVA Las l neas de referencia del control positivo se dobla ligeramente hacia el pocillo de la muestra, pero no forman una l nea continua.

4 Estas reacciones requieren de una observaci n cuidadosa y f cilmente pueden ser pasadas por POSITIVOCONDICIONES PARA REACCIONES DEBILES POSITIVAS Los potros que se alimentan de yeguas infectadas pueden ser persistentes hasta los 6 meses de edad debido a anticuerpos del calostro. Durante el per odo de incubaci n de la muestra es obtenidade dos a tres semanas m s tarde, la reacci n deber a ser m s fuerte. CONDICIONES PARA REACCIONES DEBILES POSITIVAS Portadores inaparentes que no tienen ning n signo cl nico de EIA pueden tener reacciones d biles en la prueba durante per odos largos.

5 En estos casos, muestreando de nuevo raras veces causa un cambio en la reacci PARA REACCIONES DEBILES POSITIVASa) PRUEBA DE EZIMA INUMO ENSAYO (ELISA)FUNDAMENTO DE LA PRUEBA DE ELISA La prueba detecta anticuerpos espec ficos contra la prote na p 26 del virus de la AIE en suero de caballo . Este ant geno esta adherido a los pocillos de prueba. Los anticuerpos se unen al ant geno y a adiendo un conjugado marcado con una enzima son f cilmente revelados mediante la adici n de un substrato especifico que al actuar la enzima producir un color observable a simple vista o cuantificable mediante el uso de un espectrofot metro o un color metro.

6 A mayor cantidad de Ac m s color en la prueba (Positiva)ELISA PARA AIE Un resultado positivo obtenido mediante ELISA debe comprobarse de nuevo utilizando la prueba AGID para confirmar el diagn stico, debido a que se han detectado algunos resultados positivos falsos mediante ELISA. ELISA PARA AIECOMPARACION ENTRE ELISA Y COGGINS Sensibilidad, es la proporci n de verdaderos positivos identificados por la prueba del total de enfermos. La sensibilidad es, por lo tanto, la capacidad del test para detectar la enfermedad. Especificidad, es la proporci n de verdaderos negativos identificados por la prueba del total de sanos.

7 En otras palabras, se puede definir la especificidad como la capacidad para detectar a los DE LA CASA COMERCIAL VMRDE specieMuestraPruebaSensibilidadEspecific idadEquinaSueroElisa100 %100%EquinaSueroCoggins99 %100%PRUEBA DE COGGINS(Octubre 2010-Enero 2011)TOTAL% 77 MUESTRAS POSITIVAS POR COGGINS O INMUNODIFUSI N EN GEL AGAR (IDGA) FUERON VERIFICADAS CON OTRA MARCA COMERCIAL (IDEXX) Y ADICIONALMENTE POR %TOTAL261100 % Positivos sin Coggins Positivo (NEGATIVOS) %PositivosEN ESTE CUADRO COMPARATIVO LA PRUEBA DE ELISA NOS INDICA QUE ES UNA PRUEBA MAS SENSIBLE QUE COGGINS AYUDANDONOS A DETECTAR AQUELLOS CASOS QUE SE ENCUENTRAN EN FASES INICIALES, NUESTRA RECOMENDACI N INICIAL FUE UTILIZAR EL ELISA COMO UNA PRUEBA DE SCRENNING O TAMIZAJE, Y AQUELLAS QUE RESULTEN POSITIVAS AL ELISA, CONFIRMARLAS CON NUESTRO laboratorio LA USAMOS COMO PRUEBA DE RESPALDO INTERNO PARA LOS CASOS DE RESULTADOS POSITIVOS POR LA PRUEBA COGGINS O IDGA.

8 (ya que no se puede dar el caso de Un Coggins Positivo con un Elisa Negativo)ADICIONALMENTE LAS PRUEBAS POSITIVAS A VMRD FUERON CORRIDAS CON IDEXX OBTENIENDO RESULTADOS PARA ENVIO DE MUESTRAS Muestreos de m s de 10 animales deben ser custodiados a cargo de Agrocalidad. Llenar la solicitud del ex men y su hoja de filiaci n con:Nombre equino con letra claraEdad Identificaci n individual (chip)Sexo Raza o Tipo PeloNombre y apellido del propietarioPredioProvincia, Cant n y ParroquiaFirma del Propietario y del M dico veterinario Responsable Deben tener conocimiento que todos los resultados tanto Negativos como positivos son reportados a Agrocalidad MUESTRAS Suero Equino en tubo vacutainner de tapa Roja NO se aceptan tubos con anticoagulante (tapa lila)

9 Los resultados se entregar n con lectura 72 horas (3 d as Pichincha Ecuador)