HPLC préparative 33 (0)4 70 03 73 01

1 Hotline HPLC pr parative 33 (0)4 70 03 73 01. Les grandeurs fondamentales Si dans le principe chromatographique, le mode analytique ne diff re pas du mode pr paratif, les objectifs vis s et les facteurs consid rer divergent. Un r sum succint se pr senterait comme suit : Analytique Pr parative Diam tres des colonnes 4,6 mm > 4,6 mm La capacit de charge d'un adsorbant est D bits 1 ml/min > 4 ml/min directement li e ces param tres : But Identifier et quantifier Collecter, purifier et isoler La quantit de sites actifs Facteur important Co t final du produit La surface sp cifique La porosit . Le domaine pr paratif doit en plus tenir compte de facteurs d terminant l'int r t ou la faisabilit.

2 La distribution de cette taille de pores du projet : R aliser une mise au point en mode analytique. Purification Process Cet essai analytique se fait il en mode phase inverse ou normale, en iso-cratique ou gradient (co t des solvants, capacit de charge selon le mode) ? La s lectivit est elle suffisante ? La r tention est elle assez courte pour permettre une charge maximale en pr parative ? Quelle taille de colonne et de granulom trie faut-il choisir pour la colonne pr parative? Etre certain que la colonne pr parative conduira des r sultats similaires la colonne analytique. Le solvant utilis est-il facile vaporer ? etc. Injections th oriques de quantit s croissantes sur une m me colonne Tous ces facteurs doivent tre consid r s au cas par cas mais il demeure des grandes lignes directionnelles pour mieux conduire son d veloppement pr paratif.

3 La pr parative est un compromis entre le d bit, le rendement et la puret . Transposition directe des masses inject es : m2 = m1 . (r2 / r1). (L2 / L1). Type m1 > m2 > m3 Analytique Pr parative Rayon de la colonne r1 r2. Longueur de la colonne L 1 L2. Masse inject e m 1 m2. Le but tant de purifier la quantit maximale de produit en un minimum d'injections, on cherchera en r alit augmenter consid rablement la masse m2 en chargeant la colonne jusqu' la limite de r solution des impuret s et du produit d'int r t. On peut imager cet objectif par les trac s ci-contre. Transposition des r solutions : RSprep = 1 / Dp . L / U . RSana Analytique Pr parative R solution RSana RSprep Diam tre des particules dpana dpprep Longueur de la colonne lana lprep Vitesse lin aire de la colonne uana uprep Masse inject e m 1 m2.

4 L : lprep / lana , U : uprep / uana, Dp : dpprep / dpana Si la surcharge en concentration est en g n ral pr f rable la surcharge en volume, cette derni re reste plus simple mettre en oeuvre. Il faut toutefois tenir compte de la solubilit . limite des analytes dans le solvant choisi. Le tableau ci-dessous donne une id e tr s g n rale des grandeurs que l'on peut atteindre en chromatographie pr parative. Ces indications ne sont toutefois pas exhaustives. Selon les compos s, la r solution de la colonne et les conditions op ratoires, les charges indiqu es peuvent s'av rer plus faibles ou plus importantes. Diam tre colonne D bit standard Charge pour Charge pour s lectivit > 1,5 s lectivit proche 1,2.

5 Correspondances entre diam tres, d bits et charges 4,6 mm 1 ml/min 3 20 mg 0,5 3 mg 10 mm 5 ml/min 20 100 mg 5 20 mg 21,2 mm 20 ml/min 100 400 mg 30 100 mg 30 mm 40 ml/min 150 1000 mg 50 150 mg 50 mm 120 ml/min 500 2500 mg 100 500 mg T l 33 (0)4 70 03 88 55 - Hotline 33 (0)4 70 03 73 01 - Fax 33 (0)4 70 03 82 60. e-mail HPLC pr parative Colonne prep Interchrom Modulo-cart Prep, Purification HPLC du mg au g. Les Modulo-cart Prep sont disponibles en standard en quatre diam tres internes 10,0 - 21,2 - 28,0 et 50,0 mm et des longueurs de 50 et 250 mm pour une gamme de purification du mg au g. Qualit des tubes Le Ra, valeur de surfa age des tubes, a une importance critique en chromatographie pr parative.

6 Mesur lectroniquement ou optiquement, il repr sente la diff rence entre les pics et les vall es des surfaces de tube. Plus le Ra est faible, plus la surface est lisse. Les frottements contre la surface du tube conduisent la phase mobile se d placer plut t en Purification Process r gime laminaire. Les mol cules au centre du flot se d placent plus rapidement que celles plus proche des bords du tube. C'est une des raisons majeures de l' largissement des pics et d'une faible efficacit . Pour minimiser cet effet de bord, le processus de finition de fabrication des Modulo-cart Prep est une des clef de leur tr s haute qualit . Il permet d'obtenir une surface de tube extr mement lisse (leur Ra typique est de 8 inch), r duisant consid rablement les effets de bords et augmentant ainsi l'efficacit des Modulo-cart Prep.

7 Les Modulo-cart Prep supportent des pressions de remplissage jusqu' 550 bar, ce qui contribue fortement une bonne stabilit et dur e de vie. Dispersion de l' chantillon La capacit de charge est un l ment important de l'HPLC pr parative. Quelle quantit . d' chantillon pouvons-nous injecter sur la colonne ? Surcharger la colonne ne conduit pas l'obtention de fraction pure comme le ferait une colonne correctement charg e. Plusieurs Kit de transposition de m thode analytique /. facteurs peuvent affecter la capacit de charge : les dimensions de la colonne et la surface pr parative sp cifique de la phase stationnaire employ e. Un autre facteur affectant cette capacit est la fa on dont est introduit l' chantillon sur la t te de la colonne.

8 L' chantillon entre dans la Ce kit est constitu de la colonne pr para- colonne en un spot qui a la dimension du diam tre interne du capillaire 1/16 de connexion. tive que vous souhaitez et d'une colonne Si l' chantillon n'est pas dispers galement travers la t te du lit de phase, des r gions analytique de m me longueur et de diam tre de surcharge se cr ent quand d'autres sont en sous-charge. Par exemple, si l'on utilise une interne 4,6 mm remplie avec le m me lot de colonne de 50 mm et un capillaire de connexion de 500 m de diam tre interne sans phase que votre colonne pr parative. r partiteur, alors l' chantillon sera focalis sur uniquement 0,01% de la surface de la t te Ce kit est cr sur demande, de colonne.

9 C'est videmment une perte norme en capacit . Sans compter que la t te de colonne s'encrasse pr matur ment au niveau de la zone d'arriv e de l' chantillon, ce qui va contactez nous : 04 70 03 73 09. r duire la dur e de vie de la colonne. Pour pr venir ce probl me, les Modulo-cart Prep sont ou quip s de r partiteurs dont le design maximise la dispersion du volume et de la masse de l' chantillon inject sur toute la surface de la t te de colonne. Phase stationnaire Notre technologie de silice nous permet d'obtenir des particules de silice de 10 et 15 m extr mement stable m caniquement. La surface de 425 m2/g d'Uptisphere Strategy garantit une densit de greffage importante et conduit des capacit s de charge lev es.

10 Phase stationnaire disponible en Modulo-cart Prep : Nous avons s lectionn plusieurs supports en 10 et 15 m qui nous semblent les plus adapt s la chromatographie pr parative : Uptisphere Strategy C18-3. Uptisphere Strategy C18-2. Uptisphere Strategy RP. Uptisphere Strategy SI. puriFlash C18HQ. puriFlash C18HC. Pour construire votre r f rence : voir chapitre "Purification Process" email. - Hotline HPLC pr parative 33 (0)4 70 03 73 01. Colonnes prep Interchrom Phase stationnaire La technologies Upti-prep permet d'obtenir des particules de silice de 3 et 5 m pour l'analytique mais aussi des particules de 10 et 15 m pour la chromatographie pr parative.