Test Carba NP - rekomendacje 2015 - korld.edu.pl

1 Test Carba NP i CarbAcineto - szybkie testy do wykrywania nabytych karbapenemaz u pa eczek Enterobacteriaceae, Pseudomonas spp. oraz Acinetobacter spp. rekomendacje 2015 El bieta Literacka1, Dorota abicka1, Marek Gniadkowski2, Waleria Hryniewicz1 1 Zak ad Epidemiologii i Mikrobiologii Klinicznej, Krajowy O rodek Referencyjny ds. Lekowra liwo ci Drobnoustroj w (KORLD) 2 Zak ad Mikrobiologii Molekularnej, Narodowy Instytut Lek w w Warszawie kontakt: Test Carba NP zosta opracowany przez zesp badaczy francuskich i opublikowany w 2012 roku, jako bardzo prosty biochemiczny test diagnostyczny dla laboratori w mikrobiologicznych, umo liwiaj cy szybkie wykrywanie karbapenemaz u pa eczek Enterobacteriaceae i Pseudomonas spp.

2 W czasie do 2 godzin [1, 2]. Test oparty jest na ledzeniu hydrolizy imipenemu przez karbapenemazy uwolnione z lizat w kom rek bakteryjnych, zawieszonych w buforze, zawieraj cym czerwie fenolow . W wyniku hydrolizy imipenemu nast puje zmiana pH rodowiska reakcji (zakwaszenie), kt ra obserwowana jest wizualnie, jako zmiana barwy czerwieni fenolowej na kolor ty lub pomara czowy. Wynik dodatni wiadczy o wytwarzaniu karbapenemazy przez badany izolat bakterii. Oryginalne prace podkre laj 100% czu o i 100% swoisto testu Carba NP w przypadku szczep w Enterobacteriaceae oraz 100% swoisto i czu o dla Pseudomonas spp.

3 [1, 2]. W 2014 r. opublikowany zosta wariant testu, okre lony jako CarbAcineto, umo liwiaj cy wykrywanie nabytych karbapenemaz u Acinetobacter spp., kt ry r ni si od testu Carba NP jedynie wi ksz ilo ci masy bakteryjnej oraz roztworem u ywanym do lizy kom rek bakteryjnych [3]. W Krajowym O rodku Referencyjnym ds. Lekowra liwo ci Drobnoustroj w (KORLD) przeprowadzono ocen wykrywania karbapenemaz przy u yciu testu Carba NP/CarbAcineto. Zaobserwowano 100% zgodno otrzymanych wynik w z wynikami test w fenotypowych z u yciem inhibitor w karbapenemaz, hydrolizy imipenemu w ekstrakcie bia kowym oraz PCR.

4 Badanie wykonano dla 60 szczep w Enterobacteriaceae, Pseudomonas spp. i Acinetobacter spp., wytwarzaj cych karbapenemazy MBL, KPC lub OXA-48. Dla zdecydowanej wi kszo ci szczep w, dodatni wynik testu obserwowano po 30 60 minutach, chocia dla niekt rych izolat w, zw aszcza pa eczek Acinetobacter spp., by on dodatni dopiero po dw ch godzinach inkubacji. Zasadniczo nie obserwowano r nic w odczycie i interpretacji wynik w w zale no ci od gatunku drobnoustroju i rodzaju wytwarzanej karbapenemazy. Dla nielicznych izolat w uzyskano wyniki w tpliwe, kt re wymaga y powt rzenia lub potwierdzenia inn metod.

5 Pod o em zalecanym przez KORLD do hodowli bakterii w celu wykonania test w Carba NP/CarbAcineto jest pod o e Columbia z 5% dodatkiem krwi baraniej ze wzgl du na 100% czu o i swoisto oraz naj atwiejszy odczyt i interpretacj uzyskanych wynik w. Ponadto, wysok czu o i swoisto testu Carba NP uzyskuje si dla kom rek bakteryjnych hodowanych na pod o ach nieselektywnych, takich jak: CPS (bioMerieux), CHROM agar Orientation (BD), UTI (OXOID), UTI Clarity (OXOID) oraz agar tryptozowo-sojowy (bioMerieux) i UriSelect 4 (Bio-Rad). Nale y jednak zaznaczy , i barwnik zawarty w pod o ach chromogennych ma wp yw na reakcj barwn Test Carba NP rekomendacje KORLD - 2015 Strona 2 z 6 obserwowan w te cie Carba NP, przez co odczyt testu jest trudniejszy.

6 KORLD zdecydowanie nie zaleca wykonywania testu Carba NP/CarbAcineto z innych pod o y mikrobiologicznych, w tym z pod o a McConkey oraz Mueller-Hinton (tak e MH z dodatkiem krwi) ze wzgl du na znacznie ni sz czu o test w i mo liwo stosunkowo cz stego otrzymywania wynik w fa szywie ujemnych, w zale no ci od producenta pod o a [4]. (Uwaga: W przypadku wykonania oznaczenia z pod o a innego ni pod o e Columbia z 5% krwi barani , jedynie uzyskanie wyniku dodatniego testu Carba NP/Carb Acineto jest wynikiem wiarygodnym, natomiast w przypadku otrzymania wyniku ujemnego, test nale y powt rzy dla bakterii hodowanych na pod o u Columbia z dodatkiem krwi baraniej).

7 Do badania ka dorazowo i obowi zkowo nale y do czy kontrol dodatni (izolat wytwarzaj cy karbapenemaz ) i ujemn (izolat niewytwarzaj cy karbapenemazy) w celu oceny poprawno ci wykonanego oznaczenia. W ka dym laboratorium, kt re przyst puje do wykonywania testu Carba NP/CarbAcineto, nale y r wnolegle prowadzi te klasyczne oznaczenie karbapenemaz metodami fenotypowymi, przynajmniej przez okres kilku miesi cy, dop ki laboratorium nie nabierze pewno ci, co do w a ciwego odczytu i interpretacji wynik w test w Carba NP oraz CarbAcineto.

8 Ka da niezgodno pomi dzy wynikiem test w Carba NP/CarbAcineto, a testami fenotypowymi i/lub PCR jest zawsze sygna em do uwa nego sprawdzenia wykonanych oznacze . Nale y r wnie pami ta o konieczno ci komunikowania si z KORLD w sytuacji uzyskania ewidentnie pozytywnych lub niejasnych wynik w oznacze karbapenemaz oraz nadsy ania szczep w zgodnie z wytycznymi KORLD. W wietle w asnych do wiadcze , a tak e bardzo niepokoj cego rozprzestrzeniania si szczep w pa eczek Gram-ujemnych, wytwarzaj cych nabyte karbapenemazy w Polsce, uzyskanie wiarygodnego wyniku w kr tkim czasie ma niebagatelne znaczenie, zar wno w przypadku post powania terapeutycznego z pojedynczym pacjentem, jak i wszelkich dzia a kontrolno-interwencyjnych zgodnych z Rekomendacjami Ministra Zdrowia [5].

9 Testy Carba NP i CarbAcineto s polecane przez Krajowego Konsultanta w dziedzinie mikrobiologii medycznej - Prof. Waleri Hryniewicz oraz przez Krajowy O rodek Referencyjny ds. Lekowra liwo ci Drobnoustroj w (KORLD) do rutynowego stosowania w laboratoriach mikrobiologicznych w diagnostyce izolat w niewra liwych na karbapenemy. Dodatni wynik testu nale y zawsze traktowa jako sygna do bezzw ocznego przekazania informacji Zespo owi ds. Kontroli Zaka e Szpitalnych oraz lekarzowi prowadz cemu pacjenta. Pi miennictwo 1. Nordmann P, Poirel L, Dortet L.

10 Rapid detection of carbapenemase-producing Enterobacteriaceae. Emerg Infect Dis. 2012 Sep;18(9):1503-7 2. Dortet L, Poirel L, Nordmann P. Rapid detection of carbapenemase-producing Pseudomonas spp. J Clin Microbiol. 2012 Nov;50(11):3773-6 3. Dortet L, Poirel L, Errera C, Nordmann P. CarbAcineto NP Test for Rapid Detection of Carbapenemase-Producing Acinetobacter spp. J Clin Microbiol. 2014 Jul;52(7):2359-64. 4. Dortet L, Br chard L, Poirel L, Nordmann P. Impact of the isolation medium for detection of carbapenemase-producing Enterobacteriaceae using an updated version of the Carba NP test.