MARCADORES SOROLÓGICOS PARA O DIAGNÓSTICO E …

1 11/06/2014. MARCADORES sorol GICOS para O. DIAGN STICO E ACOMPANHAMENTO. DAS HEPATITES POR V RUS. 41 Congresso Brasileiro de An lises Cl nicas Porto Alegre, 2014. Amadeo S ez-Alquezar HEPATITES. Inflama o do f gado - diversas etiologias V rus (Tropismo). Drogas lcool Auto - Imunidade 1. 11/06/2014. Hepatites por V rus Hepatite por v rus A HAV. Hepatite por v rus B HBV. Hepatite por v rus C HCV. Hepatite por v rus D HDV. Hepatite por v rus E HEV. Hepatites N o A- A -E .. V rus Epstein Bar, Citomegalov rus , Herpes, outros V rus das Hepatites A E T. Fecal Oral B C T. Parenteral Formas Cr nicas D. Outros 2. 11/06/2014. Caracter sticas dos Virus das Hepatites A B C D E. Agente HAV HBV HCV HDV HEV. Tamanho nm 27-32 42 55-65 36 27-34. Envelope N o Sim Sim do HBV N o Genoma RNA DNA rna rna rna . Formas de Transmiss o Fecal/oral Sim N o N o N o Sim Parenteral N o Sim Sim Sim N o Sexual N o Sim Pouco Sim N o frequente Formas Cr nicas N o 5 7% ~80% Sim N o Triagem em doadores O laborat rio para o Diagn stico e Seguimento das Hepatites por V rus Testes sorol gicos.

2 MARCADORES sorol gicos (Ac, Ag, Ag/Ac). Testes de biologia molecular Amplifica o de cidos nucleicos Sequenciamento Testes bioqu micos Enzimas, pigmentos biliares, prote nas. Testes de histologia hep tica Material de biopsia Outros 3. 11/06/2014. HAV e HEV. HAV. Contato pessoal Agua e alimentos contaminados Formas graves: raras (> com a idade). Vacina HEV. Agua e alimentos contaminados Formas graves Gestantes (3 trimestre). > com a idade MARCADORES sorol gicos da Hepatite por V rus A. Anti- Anti-VHA. Fase Aguda IgM. Anti- Anti-VHA Recupera o IgG Imunidade 4. 11/06/2014. MARCADORES sorol gicos da Hepatite por V rus E. Anti- Anti-VHE. Fase Aguda IgM. Anti- Anti-VHE Recupera o IgG Imunidade Infec o pelo V rus da Hepatite B (HBV). A preval ncia de infec o pelo HBV, no mundo, est ao redor de 4 5% da popula o total do planeta Portadores cr nicos assintom ticos Hepatite cr nica (350 milh es). C ncer hep tico Ocorrem em torno de 50 milh es de novos casos, por ano, de infec o pelo HBV.

3 5. 11/06/2014. Preval ncia de HBV no Mudo Source: CDC and Prevention. MMWR 2008;57(RR-8):1-20. Formas de Transmiss o do HBV. Pessoa a pessoa Sangue contaminado / Contato sexual Grupos de risco Transfus o sangu nea / Transplante de rg os (Vertical). Uso de agulhas e seringas contaminadas Usu rios de drogas, nosocomial Acidentes de laborat rio Contato sexual com m ltiplos parceiros (as). Homens que fazem sexo com homens Hemodi lise Atendentes de sa de/ contato domestico Tattoos / body piercing 6. 11/06/2014. Infec o pelo HBV - Evolu o Adultos 80% Assintom tica 5-7%. 20% Doen a Aguda Infec o cr nica >1% Hepatite Fulminante 5% a 10%. 30%. C ncer Cirrose hep tico Crian as 23% En 5 anos Quase sempre Subcl nica Transplante ou Fal ncia hep tica bito Infec o Cr nica pelo HBV. Risco de Risco para Infec o infec o cr nica C ncer hep tico Per odo > 90% 25%. Peri natal Crian as 25 50% 25%. 1 a 5 anos Crian as (>5). 6 10% 15%.

4 Adultos 7. 11/06/2014. HBV DNA circular de dupla h lice parcialmente fechada e envoltura lip dica Genoma: nucleot deos 4 Regi es abertas para leitura: S, P, C e X. AgHBs DNA Polimerase AgHBc AgHBe MARCADORES sorol gicos durante a infec o pelo HBV. AgHBs Anti- Anti-HBs Anti- Anti-HBc IgM. AgHBc Anti- Anti-HBc IgG. AgHBe Anti- Anti-HBe 8. 11/06/2014. Infec o pelo HBV. Evolu o normal Infec o Semanas HBV - DNA. Anti-HBc Total AgHBs Anti-HBe Forma cr nica AgHBe AgHBe 6 meses Tempo MARCADORES sorol gicos durante a infec o pelo HBV. AgHBs: AgHBs: 1 marcador sorol gico que aparece. Presente na fase aguda e cr nica Anti HBc (IgG). IgG). Presente na fase aguda e cr nica Anti- Anti-HBc (IgM). IgM). Diferencia o entre infec o aguda e cr nica AgHBe/. AgHBe/anti- anti-HBe Acompanhamento da evolu o (aguda e cr nica). ndice de replica o viral Anti- Anti-HBs Avalia o de cura e resposta vacina 9. 11/06/2014. Perfis sorol gicos em Indiv duos Infectados pelo HBV.

5 Anti- Anti-HBc Anti- Anti-HBc PERFIS Ag HBs Anti- Anti-HBs (IgM). IgM) (IgG). IgG). 1 + - - - 2 + + + - 3 + - + +. Imunidade por infec o natural 4 - - + +. 5 vacina Imunidade por - - - +. Hepatite B cr nica 6 + - + - ?? 7 - - + - Anti- Anti-HBc Anti- Anti-HBc PERFIL Ag HBs Anti- Anti-HBs (IgM). IgM) (IgG). IgG). 7 - - + - 1- Infec o anterior pelo HBV (com recupera o). recupera o). 2- Infec o aguda em vias de recupera o. recupera o. 3- O AgHBs est em n veis muito baixos: baixos: Infec o cr nica (Low level chronic infection). infection). 4- Mutantes do AgHBs: AgHBs: Mesmo que a maioria dos testes apresentem alta sensibilidade para detec o do AgHBs, AgHBs, alguns testes podem n o detectar mutantes. mutantes. Hepatite B Oculta . 5- Resultado falso positivo para o anti- anti-HBc. HBc. 10. 11/06/2014. Teste confirmat rio para o anti- anti-HBc Incuba o das amostras com ant geno HBc (rHBc Ag) para Inibi o da leitura % de inibi o em amostras anti-HBc positivas (n=55) e anti-HBc Negativas (n=30).

6 Diferen a significativa (p<0,001). Abbott Architect i1000 anti-HBc II. DiaSorin LIAISON anti-HB. Simple confirmatory assay for anti-HBc reactivity Huzly D, et al. J Clin Virol (2011). Siemens ADVIA Centaur HBcT. Variabilidade antig nica e gen tica do HBV. Subtipos Ant geno de superf cie (AgHBs (AgHBs). AgHBs). Gen tipos Grupos gn micos Mutantes Muta es no genoma viral 11. 11/06/2014. Subtipos sorol gicos do HBV. Afinidade Ac: -infec o pelo HBV. a -vacinados -Gama globulinas -kits diagn sticos d y w r w r adw2 adq+. adq+ ayw1. ayr adw4 adq- adq- ayw2. ayw3. ayw4. Determinantes antig nicos Determinante a . Seus determinantes: d/y ou w/r Gen tipos do HBV. A B C D E F G H I-J. HBV Gen tipos Distribui o Geogr fica A, D Global B,C > Preval ncia na sia E frica Ocidental e central F Centro Am rica e Am rica do Sul G USA, Jap o e Europa H Centro Am rica e Regi es do Sul e USA. I Oriente e Sudeste de sia J Jap o Zhang Y, Li C, Zhang Y, Zhu H, et al.

7 (2013) Comparative Analysis of CpG Islands among HBV Genotypes. PLoS ONE 8(2): e56711. : 12. 11/06/2014. Import ncia dos Gen tipos Prever o curso cl nico da doen a e a resposta terap utica Gen tipo C: pode evoluir para formas mais graves e com maior risco para c ncer hep tico. Gen tipos A-B: Respondem melhor ao tratamento com int rferon Comportamento diferente frente a kits diagn sticos Gen tipo A, usado como padr o nos standards . internacionais e na fabrica o de kits AgHBs Mutantes do HBV. Gerados espontaneamente durante o curso da infec o natural pelo HBV. Gerados num ambiente de press o seletiva Uso de imuno profilaxia ativa Uso de imuno profilaxia passiva Tratamento com antivirais 13. 11/06/2014. Principais Muta es observadas no HBV. Mutantes pr - pr -Core Encontrados em cepas mais virulentas Ex: aa gly, substitu do por aa arg [PCR DNA-HBV (+) e AgHBe (-)]. Mutantes no gene P (polimerase). Resist ncia a antivirais Lamivudina, Adefovir.

8 Mutantes no gene X. Associados ao surgimento de c ncer hep tico Mutantes no gene S. Modificam os epit pos imuno dominantes do determinante antig nico a . Desempenho de diversos kits AgHBs frente a um painel de Mutantes AgHBs rec Performance de kits diagn sticos Ag HBs Painel de refer ncia: Mutantes Ag HBs rec Ab : MONO / POLI Ab: MONO / MONO. Fluoresc ncia EIA color Quimiolum EIA color VIDAS Hepanostica MONOLISA. Mutantes AgHBs rec AxSYM HBsAg HBsAg HBsAg Elecsys Vitros Enzygnost Ortho HBsAg (V2) (ultra) Uniform II (Ultra) HBsAg I HBsAg HBsAg HBsAg Thr126-Ser 7,96 (Pos) 9,7 (Pos) 1,96 (Pos) 6,19 (Pos) 9,88 (Pos) 12,9 (Pos) 9,35 (Pos) 5,33 (Pos). Gln129-His 7,02 (Pos 8,5 (Pos) 1,96 (Pos) 7,49 (Pos) 9,70 (Pos) 13,7 (Pos) 8,81 (Pos) 6,43 (Pos). Met133-Leu 7,17 (Pos) 8,7 (Pos) 2,00 (Pos) 6,35 (Pos) 8,59 (Pos) 11,2 (Pos) 9,01 (Pos) 5,65 (Pos). Asp144-Ala 5,56 (Pos) 5,4 (Pos) 1,48 (Pos) 6,33 (Pos) 7,73 (Pos) 0,15 (Neg) 7,61 (Pos) 0,71 (Neg).)

9 Gly145-Arg 5,56 (Pos) 5,8 (Pos) 1,53 (Pos) 4,91 (Pos) 0,46 (Neg) 0,06 (Neg) (Neg) 0,43 (Neg). Thr126-Ser + Gly145-Arg 4,77 (Pos) 10,5 (Pos) 1,36 (Pos) 4,20 (Pos) 0,48 (Neg) 0,06 (Neg) 0,83 (Neg) 0,47 (Neg). Pro142=Leu + Gly145-Arg 5,80 (Pos) 4,9 (Pos) 1,29 (Pos) 3,74 (Pos) 0,48 (Neg) 0,06 (Neg) 0,61 (Neg) 0,43 (Neg). Pro142-Ser + Gly145-Arg 5,94 (Pos) 5,8 (Pos) 1,48 (Pos) 5,04 (Pos) 0,46 (Neg) 0,04 (Neg) 0,26 (Neg) 0,43 (Neg). Asp144-Ala + Gly145-Arg 5,25 (Pos) 6,1 (Pos) 1,58 (Pos) 4,19 (Pos) 0,47 (Neg) 0,09 (Neg) 0,61 (Neg) 0,47 (Neg). Controle Negativo 1,06 (Neg) 0,08 (Neg) 0,54 (Neg) 0,57 (Neg) 0,47 (Neg) 0,08 (Neg) 0,39 (Neg) 0,45 (Neg). Controle Positivo* 8,69 (Pos) 1,3 (Pos) 2,20 (Pos) 7,53 (Pos) 10,1 (Pos) 15,6 (Pos) 9,45 (Pos) 7,35 (Pos). (*): recombinant Wild-type HBS Ag Louisirirotchanakul, S et al. HBsAg diagnostic kits in the detection of hepatitis B. Virus mutation within a determinant. Viral. Immunology 2006; 19(1): 108-114.

10 14. 11/06/2014. DETEC O DE MUTANTES DO AgHBs AgHBs Bioelisa colour 65,7. Enzygnost 75,3. ETI-MAK-4 82,2. Murex V3 84,9. Prism 87,7. Hepanostika Ultra 87,7. Architect 96,9. Monolisa Ultra 97,2. 0 20 40 60 80 100. MUTANTES. G145R; P120S/T125M/P127T/S143L; Y100S/T114S/T118V/N131T/K133I/F134N/P142 S/T143L/G145K; S113T/T143S. T123N/C124R; P120T; T123N; D144A; M133T/Y161F; Q129R/G130N/A166V; M133T/Y161F; Q129R/G130N/A166V;. M133T; T118A/D144E; T125M/P127T/T143L; S143L; L109P/T127A/S143L; K141E/K160R; C147W; 122NT123;. G119R; P120L; G119R; P120L; G119R/P120L; T126S. ISBT XXth Regional Congress, Nagoya, 2009. DESEMPENHO NA DETEC O DE MUTANTES / AgHBs 15. 11/06/2014. Hepatite B Oculta Infec o oculta pelo HBV define- define-se como a presen a de HBV- HBV-DNA no sangue ou tecido hep tico em pacientes que s o negativos para o ant geno de superf cie (AgHBs (AgHBs). AgHBs). Esses pacientes poder o ser positivos, ou n o, para anticorpos contra o HBV.