PÉPTIDOS Y PROTEÍNAS - UNR

1 1C TEDRA: BIOQU MICA Carreras: Farmacia Profesorado en Qu mica Licenciatura en Qu mica Licenciatura en Alimentos P ptidos Y PROTE NAS 1) Escriba en f rmulas el pentap ptido Phe-His-Met-Leu-Asp. Sometido el mismo a una electroforesis, hacia qu electrodo migrar a pH = 7 y a pH = 2? 2) Cu l es la carga neta del tetrap ptido DCRK a: 1) pH=5; 2) pH=14. Cu l ser el pI aproximado de este tetrap ptido? 3) A cu l de los siguientes pHs se separar mejor por electroforesis una mezcla de los amino cidos Pro, Asp y Lys a: a) pH=2; b) pH=7; c) pH=12? 4) Escriba la f rmula del pentap ptido Pro-Glu-Asp-Trp-Ser. Calcule su pI.

2 Indique hacia qu electrodo migrar cuando se lo someta a electroforesis a pH= 7 y a pH= 2. 5) La angiotensina II es un octap ptido que cumple funciones biol gicas importantes, participando en la regulaci n de la presi n sangu nea y de la formaci n y secreci n de aldosterona. Escriba en f rmulas el octap ptido angiotensina II: Asp-Arg-Val-Tyr-Ile-His-Pro-Phe y. calcule su punto isoel ctrico. 6) Al realizar la s ntesis de un trip ptido un estudiante descubre que la mezcla de reacci n contiene dos trip ptidos . Trip ptido A: Glu-Ala-Lys; Trip ptido B: Glu-Ala-Ala. Decide entonces separarlos mediante electroforesis en papel.

3 A) Calcule el pI para cada p ptido. b) A partir de los resultados anteriores qu pH deber a usar para recuperar el p ptido A en el c todo? 7) Se resolvieron electrofor ticamente cuatro dip ptidos de una mezcla y se determin experimentalmente el pI de cada uno de ellos. Por otro m todo se obtuvo la composici n de cada dip ptido. Composici n obtenida: Asp-Glu; Ala-Ala; Ala-Lys; Ala-Glu. pI obtenidos: 10,11- 6,3- 3,25 y 2,98. Podr a correlacionar cada pI determinado con cada dip ptido? 8) Una prote na que contiene Fe fue tratada con bromuro de cian geno. Se produjeron tres polip ptidos de MM 250000, 116000 y 50000 kDa, respectivamente, cuyos grupos amino terminales fueron Phe, Tyr y Leu.

4 El tratamiento con tripsina de estos p ptidos produjo 2 polip ptidos m s, cuyos grupos terminales fueron Ala y Thr. Indique la masa molecular de la prote na y el n mero de moles de residuos de Met por mol de prote na. Si dicha prote na se encuentra fosforilada en el grupo amino terminal, indique cu l es dicho amino cido. 9) Cu ntos amino cidos est n contenidos en una prote na de PM = , sabiendo que el peso molecular promedio de un amino cido en la cadena polipept dica es de 110? De d nde proviene este valor de masa molecular 110 Da? 210) Un antibi tico polipept dico de Bacilus brevis forma complejos con iones met licos y aparentemente inhibe el transporte i nico a trav s de las membranas matando a ciertas especies bacterianas.

5 En el an lisis de la estructura se encuentra que: a) La hidr lisis cida completa del p ptido seguida del an lisis de amino cidos dio cantidades equimoleculares de Leu, Pro, Orn, Val y Phe. b) La medida del PM dio 1100 aproximadamente. c) No se hidroliz con carboxipeptidasa. d) El tratamiento del p ptido con fluorodinitrobenceno seguido de hidr lisis completa y cromatograf a no gener ning n derivado dinitrofenilado en N-alfa. e) La hidr lisis parcial del p ptido seguida de separaci n cromatogr fica y secuenciaci n gener los siguientes p ptidos : Leu-Phe Phe-Pro Val-Orn-Leu Orn-Leu Phe-Pro-Val Val-Orn Pro-Val-Orn Deduzca la secuencia del p ptido.

6 11) Determine la secuencia de un tetrap ptido de las siguientes caracter sticas: a) Contiene un amino cido que interrumpe la estructura secundaria de alfa-h lices b) Al tratar el tetrap ptido con el reactivo de Sanger se obtiene un derivado dinitrofenilado DNP pticamente inactivo. c) Al tratarlo brevemente con carboxipeptidasa libera el m s b sico de los amino cidos. d) El p ptido no contiene azufre, pero posee el grupo imidazol. e) Puede romperse en dos p ptidos ; ambos dip ptidos migran hacia el c todo en una electroforesis a pH=4. 12) Ud. aisl de un homogenado de cerebro un p ptido con actividad de encefalina (opioide). Estos se unen a receptores localizados en el cerebro (a los que se unen drogas derivadas del opio, morfina) disminuyendo el dolor.

7 Al analizarlo encuentra que: a) La hidr lisis completa en HCl 6 M a 110 C seguida del an lisis de amino cidos indica la presencia de Gly, Leu, Phe y Tyr en una relaci n 2:1:1:1. b) El tratamiento del p ptido con 2,4-dinitrofluorobenceno seguido de hidr lisis completa y cromatograf a indic la existencia de Tyr-DNP. No se encontr Tyr libre. c) La hidr lisis con quimotripsina seguida de cromatograf a indic la presencia de Leu y Tyr libres y un trip ptido cuya composici n en amino cidos indic la presencia de Gly y Phe en una relaci n 2:1. Determine la secuencia de esta encefalina. 13) La angiotensina II es un p ptido biol gicamente activo, que en animales tiene un efecto hipertensivo estimulando la liberaci n de aldosterona de gl ndulas adrenales.

8 Un estudio realizado con angiotensina II de caballo brind los siguientes resultados: a) El tratamiento de la angiotensina II purificada con tripsina rindi un dip ptido (conteniendo Arg y Asp) y un hexap ptido. b) El hexap ptido del paso anterior se purific y se trat con quimotripsina, obteni ndose un dip ptido (conteniendo Tyr y Val) y un tetrap ptido. c) Luego de purificar este tetrap ptido se trat con papa na, obteni ndose dos p ptidos diferentes, uno conteniendo His e Ile y el otro Phe y Pro. 3d) En todos los casos los productos guardaban una relaci n molar 1:1. En base a estos datos escriba con el c digo de tres letras y en f rmulas la angiotensina II de caballo y calcule su punto isoel ctrico.

9 14) Deduzca la secuencia de amino cidos de un p ptido a partir de la siguiente informaci n: a) La composici n es Met, Tyr, Ser, Phe, Gly, Lys y Ala. b) Tratado con el reactivo de Sanger da como nico derivado el di-DNP-lisina, en los carbonos alfa y gamma de la misma. c) Tratado con BrCN da un dip ptido que contiene Lys y Met, y un segundo p ptido que tiene el resto de los amino cidos d) Tratado con carboxipeptidasa A, libera r pidamente Gly. e) El tratamiento con quimotripsina libera tres p ptidos : uno que contiene Tyr, Lys y Met, el segundo contiene Ala y Gly, y el tercero Ser y Phe. 15) Un p ptido contiene cantidades equimoleculares de Met, Phe, Asp, Ser, Thr.

10 Cuando se trata con BrCN da un p ptido y un amino cido libre: Met. Si se trata con quimotripsina da 2 fragmentos siendo uno m s cido que el otro; el fragmento cido contiene Met. Al tratar el p ptido con carboxipeptidasa A, libera r pidamente Ser y a continuaci n Thr. Deduzca la secuencia del p ptido. 16) Un p ptido de 12 amino cidos es sometido a 3 tratamientos por separado: a) Corte por tripsina, produci ndose los p ptidos Val-Ala-Phe-Leu-Lys, Met-Trp-Pro-Arg y Val-Met-Gly. b) Corte con carboxipeptidasa, observ ndose liberaci n inicial de Gly. c) Corte con una proteasa capaz de cortar s lo hacia el N-terminal de las alaninas, generando en este caso un pentap ptido y un heptap ptido.