EXTRACCIÓN DE ADN

1 UNIVERSIDAD NACIONAL AUT NOMA DE M XICO COLEGIO DE CIENCIAS Y HUMANIDADES REA DE CIENCIAS EXPERIMENTALES PLANTEL NAUCALPAN EEXXTTRRAACCCCII NN DDEE AADDNN BBIIOOLLOOGG AA II TERCERA UNIDAD C MO SE TRANSMITE Y MODIFICA LA INFORMACI N GEN TICA EN LOS SISTEMAS VIVOS? Aprendizajes Describe la tecnolog a del ADN recombinante y sus aplicaciones. Aplica habilidades y actitudes, al dise ar y llevar a cabo investigaciones documentales y experimentales que contribuyan a la comprensi n de la transmisi n y modificaci n de las caracter sticas hereditarias. Comunica de forma oral y escrita la informaci n derivada de las actividades realizadas. DDIISSEE :: BBII EELLEENNAA DD VVIILLAA CCAASSTTIILLLLOO 22000033 UNIVERSIDAD NACIONAL AUT NOMA DE M XICO COLEGIO DE CIENCIAS Y HUMANIDADES REA DE CIENCIAS EXPERIMENTALES PLANTEL NAUCALPAN Bi l. Ma. Elena D vila Castillo CCH-Naucalpan 2 Tema II. La ingenier a gen tica y sus aplicaciones.

2 Aspectos generales de la tecnolog a del ADN recombinante. Nombre:_____grupo____ EXTRACCI N DE ADN I. INTRODUCCI N El cido desoxirribonucleico (ADN), es el material gen tico de todos los organismos vivos y de casi todos los virus. Es el ADN quien lleva la informaci n necesaria para dirigir la s ntesis de prote nas y la duplicaci n de la misma mol cula. Esta biomol cula fue detectada en el n cleo celular por el investigador F. Miesher en 1869, y desde los a os cuarenta O. Avery y sus colaborados descubrieron que el material gen tico est formado de ADN. En las ltimas d cadas, la Biolog a se ha enriquecido con una variedad de t cnicas que han permitido la posibilidad de entender con mayor precisi n, estructuras, funciones, mecanismos o fen menos de los sistemas vivos. La manipulaci n del ADN, es uno de los ejemplos m s espectaculares del avance de la aplicaci n de una serie de herramientas, que anteriormente no se contemplaban en el campo cient fico y que en la actualidad, se usan de manera rutinaria para desarrollar una amplia variedad de estudios gen ticos.

3 Para estudiar el ADN es imprescindible aislarlo e identificarlo. Existen diferentes m todos de aislamiento , dependiendo del tipo de estudios o investigaci n que se quiera realizar. Sin embargo todos comparten el hecho de que, debido a que la mol cula se encuentra al interior de estructuras membranosas y est asociada con prote nas, se requiere usar sustancias adecuadas para obtener al ADN de la forma m s purificada posible. La t cnica utilizada en esta actividad experimental, se basa por un lado, en el principio de que el componente fundamental de las membranas plasm tica y nuclear, son los l pidos, por lo cual se utiliza un detergente (surfactante) para romper estas estructuras y permitir la salida del ADN. Por otro lado, el ADN de vegetales y animales se encuentra asociado a prote nas de tipo histona, por lo tanto, al agregarle alcohol se precipitan las prote nas y de esta forma se obtiene al ADN como una estructura m s pura.

4 Finalmente, se conoce que el ADN es una mol cula de car cter cido, lo que le permite ser identificada con colorantes espec ficos como el anaranjado de acridina. UNIVERSIDAD NACIONAL AUT NOMA DE M XICO COLEGIO DE CIENCIAS Y HUMANIDADES REA DE CIENCIAS EXPERIMENTALES PLANTEL NAUCALPAN Bi l. Ma. Elena D vila Castillo CCH-Naucalpan 3II. OBJETIVOS Efectuar la t cnica de extracci n y aislamiento de ADN en h gado de pollo y en ch charos para visualizar el aspecto real de este tipo de cido nucleico. Diferenciar entre el Modelo del ADN propuesto por Waston y Crick y el aspecto real del cido desoxirribonucleico extra do por esta t cnica. Comprender que esta t cnica, es s lo el inicio de otras que se aplican en el mbito cient fico para resolver problemas de gen tica humana y mejoramiento de razas y variedades. Profundizar la comprensi n de conceptos relacionados con la Ingenier a gen tica y sus aplicaciones y promover el desarrollo de habilidades y destrezas.

5 III. MATERIAL Y EQUIPO (Si se utiliza dos veces el mismo material, cuidar que est limpio) & 2 probetas graduadas de 50 ml. & 1 varilla de vidrio. & 1 portaobjetos. & 1 cubreobjetos. & 1 vaso de precipitados de 50 ml. & 1 caja de Petri. & 1 gotero. & 1 mortero. & 1 bistur . & 1 aguja de disecci n. & 1 balanza digital o granataria. & 1 microscopio de contraste de fases. & 1 coladera fina (traer de su casa). IV. Material Biol gico 2 gramos (g) de h gado de pollo o de ternera. 10 gramos (g) de ch charos. V. SUSTANCIAS 10 ml. de agua desionizada o destilada. 20 ml. de soluci n de desoxicolato de sodio (disolver 1 g. de desoxicolato en 60 ml. de agua destilada o desionizada). (Nota: Se puede sustituir el desoxicolato por el detergente Roma) 20 ml. de etanol absoluto o al 95% FRIO (el alcohol debe estar a 4 oC. por lo menos 1 hora antes de iniciar la actividad y permanecer en hielo durante todo el experimento). Colorante Anaranjado de Acridina.

6 UNIVERSIDAD NACIONAL AUT NOMA DE M XICO COLEGIO DE CIENCIAS Y HUMANIDADES REA DE CIENCIAS EXPERIMENTALES PLANTEL NAUCALPAN Bi l. Ma. Elena D vila Castillo CCH-Naucalpan 4VI. PROCEDIMIENTO 1. Cortar un trozo peque o de h gado con la ayuda de un bistur o desvainar algunos ch charos. 2. Pesar en una caja de Petri 2 g. de h gado o 10 g. de ch charos. 3. Triturar en un mortero el h gado o los ch charos con agua desionizada o destilada. 4. Separar el l quido obtenido en cada trituraci n en el vaso de precipitados con ayuda de una coladera. 5. Verter el l quido en una probeta, a adir 20 ml. de soluci n de desoxicolato de sodio (o soluci n de detergente Roma) y agitar SUAVEMENTE con la varilla de vidrio. 6. Incorporar LENTAMENTE el etanol y esperar por lo menos dos minutos para observar unos filamentos blanquecinos que es el ADN extra do por esta t cnica (Ver Figura 1), algunos de estos filamentos quedan adheridos a la varilla de vidrio.

7 AGITAR LENTAMENTE EN FORMA ROTATORIA, S LO SI ES NECESARIO. 7. Tomar una muestra de los filamentos blanquecinos con una aguja de disecci n, con la varilla de vidrio o con un gotero y colocarlos sobre el portaobjetos. 8. A adir una gota de anaranjado de acridina y colocar el cubreobjetos. 9. Observar los filamentos del ADN al microscopio con los objetivos 10x y 20x (Ver Figura 2 UNIVERSIDAD NACIONAL AUT NOMA DE M XICO COLEGIO DE CIENCIAS Y HUMANIDADES REA DE CIENCIAS EXPERIMENTALES PLANTEL NAUCALPAN Bi l. Ma. Elena D vila Castillo CCH-Naucalpan 5 Figura 1. a) ADN de h gado de pollo. b) ADN de ch charo. Figura 2. Filamentos de ADN (20x) UNIVERSIDAD NACIONAL AUT NOMA DE M XICO COLEGIO DE CIENCIAS Y HUMANIDADES REA DE CIENCIAS EXPERIMENTALES PLANTEL NAUCALPAN Bi l. Ma. Elena D vila Castillo CCH-Naucalpan 610. VII. RESULTADOS Y AN LISIS ESQUEMATICE EL PROCEDIMIENTOS QUE UTILIZ PARA EXTRACCI N Y aislamiento DEL ADN. DIBUJE LO OBSERVADO EN EL MICROSCOPIO CON LOS OBJETIVOS DE 10X Y 20X.

8 UNIVERSIDAD NACIONAL AUT NOMA DE M XICO COLEGIO DE CIENCIAS Y HUMANIDADES REA DE CIENCIAS EXPERIMENTALES PLANTEL NAUCALPAN Bi l. Ma. Elena D vila Castillo CCH-Naucalpan 7 VIII. PREGUNTAS PARA DISCUSI N 1. Para qu se utiliz el desoxicolato de sodio y etanol en esta t cnica?. 2. C mo se puede determinar que lo que se obtuvo mediante esta t cnica fue ADN y no prote nas u otras sustancias?. 3. Describa e ilustre el experimento de Hershey y Chase (1952), para demostrar que el ADN era la clave de la herencia. 4. Explique brevemente en qu consiste el Modelo de ADN de Waston y Crick y c mo contribuy en el desarrollo de la Ingenier a Gen tica. 5. Describa los aspectos generales y esquematice cada una de las siguientes t cnicas: a) ADN Recombinante. b) Formaci n de Organismos Transg nicos. c) Clonaci n de Organismos d) Terapia G nica 6. Diga algunas ventajas y desventajas (implicaciones bio ticas) del Proyecto del Genoma Humano y de la clonaci n de organismos.

9 IX. CONCLUSIONES UNIVERSIDAD NACIONAL AUT NOMA DE M XICO COLEGIO DE CIENCIAS Y HUMANIDADES REA DE CIENCIAS EXPERIMENTALES PLANTEL NAUCALPAN Bi l. Ma. Elena D vila Castillo CCH-Naucalpan 8 BIBLIOGRAF A Alberts, B., et al. 1998. Biolog a Molecular de la C lula. 4 . Edici n. Omega. Espa a. Audesirk, T. y Audesirk, G. 2003. Biolog a: La Vida en la Tierra. 6 . Edici n Prentice Hall. M xico. Arambarri, G. R., L pez, M. R., M dicis V., A., Rodr guez, A. J. y Torres, J. J. 1998. Paquete Did ctico de Gen tica para Biolog a I y II. Laboratorio LACE SILADIN. Colegio de Ciencias y Humanidades. Plantel Oriente. UNAM. pp. 85-91. Bernstein, R. y Bernstein S. 2001. Biolog a. Mc. Graw-Hill. Curtis, H. y Barnes N. S. 1997. Invitaci n a la Biolog a. 5 . Edici n. Editorial M dica Panamericana. Espa a. D vila, C. M. E. y Marmolejo S. C. 2000. Extracci n de ADN de C lulas Animales y Vegetales. Colegio de Ciencias y Humanidades.

10 Plantel Naucapan. UNAM. Mendiola, R. G. 1999. aislamiento del ADN en C lulas Animales y Vegetales. Colegio de Ciencias y Humanidades. Plantel Naucapan. UNAM. Velasco, S. J. y Merch n, M. 1998. Biolog a y Ecolog a. Editorial Editex. Espa a.