Introducción al cultivo de tejidos

1 JM Garc a P gina 1 de 32 Versi n 8/7/2002 Introducci n al cultivo de tejidos Versi n 1. Introducci n hist rica 2. Qu entendemos por cultivo de tejidos ? Tipos de cultivos de tejidos Tipos de c lulas 3. Ventajas y limitaciones 4. Aplicaciones 5. Establecimiento de un cultivo celular 6. Bancos y colecciones de l neas celulares 7. Almacenamiento de c lulas 8. El laboratorio Cabina de flujo laminar Incubador de CO2 Microscopios Congeladores y equipo de criogenia Equipo de esterilizaci n y filtraci n Otros instrumentos 9.

2 El substrato y el medio de cultivo Ap ndices Ap ndice A: T rminos Ap ndice B: Bibliograf a Ap ndice C: Historial Ap ndice D: Mejoras pendientes de realizar 3567911131517192021222324252729JM Garc a P gina 2 de 32 Versi n 8/7/2002 JM Garc a P gina 3 de 32 Versi n 8/7/2002 1. Introducci n hist rica En el siguiente cuadro se muestran algunos de los hechos hist ricos m s relevantes en el desarrollo de las t cnicas y m todos de cultivo de tejidos 1885 Roux Consigui mantener durante d as c lulas de embri n de pollo en una soluci n salina 1907 Harrison Utiliz t cnicas de estudio in vitro para el estudio de fen menos in vivo.

3 Y demostr el crecimiento de fibras nerviosas en cultivo 1910 Burrows Emple plasma de pollo para nutrir los cultivos embrionarios de pollo 1913 Carrel Demostr la posibilidad de mantener en cultivo c lulas de embri n de pollo, en condiciones de asepsia, durante un tiempo superior a la vida del animal 1916 Rous y Jones Utilizaron por primera vez extractos enriquecidos en tripsina para disociar c lulas de los tejidos 1948 Sanford y cols. Demuestran la formaci n de clones celulares 1952 Gey y cols. Establecen la primera l nea celular humana cont nua, las c lulas HeLa Levi-Montalcini y cols.

4 Determinan que el factor de crecimiento nervioso (NGF) estimula el crecimiento de axones en cultivo 1954 Abercrombie y cols. Observan la inhibici n de crecimiento por contacto en fibroblastos 1955 Eagle Desarrolla medios definidos y describe factores de adhesi n 1958 Temin y Rubin Desarrollan un ensayo cuantitativo para la infecci n de c lulas de pollo en cultivo por el virus del sarcoma de Rous 1961 Hayflick y Moorehead Describen la vida finita de las c lulas humanas diploides 1962 Buonassisi Publica los m todos para mantener c lulas diferenciadas 1964 Littlefield Introdice el medio HAT para el crecimiento selectivo de c lulas h

5 Bridas, y desarrolla las t cnicas de fusi n celular Ham Utiliza el primer medio definido libre de suero 1965 Harris y Watkins Producen el primer heterocarion de c lulas de mam fero por la fusi n inducida por virus de c lulas humanas y de rat n 1968 Yaffe Estudia la diferenciaci n de mioblastos normales in vitro 1969 Augusti-Tocco y Sato Establecen la primera l nea celular estable de neuroblastoma, l nea de celulas diferenciada 1975 K hler y Milstein Establecen la primera l nea celular productora de anticuerpos monoclonales 1976 Sato y cols.

6 Publican una serie de trabajos que demuestran las distintas necesidades de hormonas y factores de crecimiento que precisan diferentes l neas celulares 1977 Wigler y Axel Desarrollan un m todo eficiente para introducir una copia simple de genes de mam fero en c lulas en cultivo 1986 Mart n y Evans A slan y cultivan c lulas madre embrionarias pluripotenciales del rat n 1998 Thomson y Gearhart A slan c lulas madre embrionarias humanas JM Garc a P gina 4 de 32 Versi n 8/7/2002 JM Garc a P gina 5 de 32 Versi n 8/7/2002 2.

7 Qu entendemos por cultivo de tejidos ? Podemos decir que es el conjunto de t cnicas que nos permiten mantener c lulas in vitro con una gran aproximaci n a sus propiedades y funciones in vivo. Dependiendo del grado de preservaci n de la estructura del tejido u rgano de origen y del tiempo de su duraci n distinguimos diferentes tipos de cultivos : de rganos, explantes, primarios, secundarios, etc. El t rmino cultivo de tejidos suele ser usado como un t rmino gen rico que incluye el de cultivo de rganos y el de cultivo de c lulas.

8 JM Garc a P gina 6 de 32 Versi n 8/7/2002 Tipos de cultivos de tejidos cultivo de rganos: En este tipo de cultivo la organizaci n tridimensional del rgano in vivo se mantiene, aunque s lo sea parcialmente, y mantiene todas o algunas de las caracter sticas histol gicas del tejido original. El rgano o porci n del mismo se mantiene en un medio l quido del que extrae los nutrientes y al que elimina los desechos metab licos. Los diferentes tipos de c lulas se mantienen en su forma diferenciada y constituye una buena r plica del rgano original.

9 Pero, sin embargo, generalmente no permite la propagaci n, ya que el crecimiento de c lulas se produce nicamente en la periferia. Normalmente este tipo de cultivo es dif cil de mantener durante un tiempo prolongado debido a las diferencias potenciales de crecimiento de los distintos tipos celulares que constituyen el rgano. La falta de propagaci n tiene como consecuencia que para repetir el experimento se necesite nuevo material, por lo que se produce cierta heterogeneidad de muestras.

10 Explantes primarios: Constituidos por fragmentos peque os de tejidos u rganos que se adhieren a una superficie en la que generalmente crecen las c lulas m s perif ricas del explante. Un cultivo se denomina cultivo primario cuando las c lulas o tejidos procedentes de un ser vivo crecen sin haber pasado previamente por una fase de crecimiento in vitro. Un cultivo se denomina cultivo secundario cuando procede de una fase previa de crecimiento in vitro. cultivo de c lulas: Este tipo de cultivo est formado por c lulas dispersas disgregadas de un tejido vivo, de un cultivo primario, o de una l nea celular, mediante distintos sistemas mec nicos, qu micos o enzim ticos.