PRESENTACION AGH Anti-globulina humana …

1 anti -HUMAN GLOBULIN PRESENTACION S lo para uso diagn stico in vitro REF 10 mL anti -Human Globulin 3410010 AGH Anti-globulina humana poliespec fica Ensayo cualitativo para la detecci n de anticuerpos o componentes del complemento humano. PRUEBA EN TUBO ALMACENAMIENTO Y ESTABILIDAD 1. Todos estos reactivos son estables hasta la fecha de caducidad indicada en la etiqueta del vial, cuando se mantienen bien cerrados a 2-8 C y se evita la contaminaci n durante su uso.

2 No usar los reactivos una vez caducados. 2. No congelar o exponer el reactivo a altas temperaturas. La conservaci n del producto a temperatura distinta de la recomendada acelera la perdida de reactividad de producto. 3. Estos reactivos deben ser claros y transparentes. La presencia de turbidez puede indicar contaminaci n microbiana. 4. Descartar el contenido del vial, en caso de turbidez, rotura o p rdida de contenido. MUESTRAS Las muestras de sangre pueden ser extra das con o sin anticoagulante.

3 Se debe realizar el ensayo lo antes posible tras su extracci n. Conservar las muestras a 2-8 C. Ensayar el suero antes de 24 horas, mantenido a 2-8 C desde la separaci n del coagulo. No se debe usar muestras hemolizadas o contaminas. EQUIPO ADICIONAL - Tubos de vidrio (10x75 mm 12x75 mm). - Pipetas Pasteur. - Ba o a 37 C. - Centrifuga Sero-fuge o similar. REACTIVOS ADICIONALES - Tamp n Fosfato (PBS): 8,5-9,0 g/L NaCl (0,145 mol/L 0,154 mol/L) pH 7,0 0,2 a 22 1 C.

4 - Hemat es control: Negativo (hemat es Rh negativos sensibilizados con anti -D) y Positivo (hemat es Rh positivos sensibilizados con anti -D d bil). TECNICA I 1. 2. 3. 4. Test de Coombs Indirecto En un tubo de hem lisis depositar 1 gota de suero problema. A adir 1 gota de suspensi n de hemat es lavados (como m nimo 1 vez) al 3% en PBS. Mezclar e incubar a 37 C durante 30-60 minutos. Lavar la mezcla 3 veces con abundante PBS. Lavado (Nota 1): llenar el tubo con PBS (aprox.)

5 4 mL) y centrifugar los hemat es el tiempo adecuado para que sedimenten bien los hemat es, decantar el FUNDAMENTO La prueba de la antiglobulina o prueba de Coombs, permite la detecci n e identificaci n de globulinas ligadas inmunol gicamente a los hemat es. La adici n del reactivo antiglobulina a los mismos ocasionar su aglutinaci n. APLICACIONES Prueba de Coombs Indirecto - Detecci n de anticuerpos irregulares - Pruebas de compatibilidad - Determinaci n de fenotipos - Identificaci n y titulaci n de anticuerpos Prueba de Coombs Directo - Enfermedad hemol tica del reci n nacido - Anemia hemol tica autoinmune - Reacci n hemol tica post-transfusional COMPOSICION DE LOS REACTIVOS El reactivo de Anti-globulina humana es una mezcla de anti -IgG humana policlonal y C3d monoclonal.

6 El reactivo coloreado verde permite comprobar visualmente la adici n del mismo a todos los tubos. anti -HUMAN GLOBULIN Suero de conejo anti -IgG humana purificada. Anticuerpo monoclonal anti -C3d (murino). Tamp n estabilizante. Azida s dica <0,1%. Colorantes: Patent Blue y Tartrazine. Precauciones: Se aconseja manipular los reactivos y las muestras con las precauciones debidas. Usar guantes y ropa protectora. Aviso: Los reactivos contienen azida s dica. Evitar el contacto con la piel y mucosas.

7 PREPARACION DE LOS REACTIVOS Los reactivos est n listos para su uso. QUALITY SYSTEM CERTIFIED ISO 9001 ISO 13485 LINEAR CHEMICALS Joaquim Costa 18 2 planta. 08390 Montgat, Barcelona, SPAIN Telf. (+34) 934 694 990 Fax. (+34) 934 693 435. website 1. LIMITACIONES DEL PROCEDIMIENTO - El lavado inadecuado de los hemat es, la contaminaci n de los reactivos con trazas de suero, tiempos de incubaci n y centrifugado incorrectos, mal control de la temperatura e inadecuada conservaci n u omisi n de los reactivos dan reacciones negativas falsas.

8 - Los hemat es problema, tanto de pacientes como de donantes, con Pruebas Directas positivas dar n un falso resultado positivo si se les practica la Prueba de la antiglobulina Indirecta. - El suero usado no debe ser conservado mas de 24 h a 2-8 C o 1 mes a 20 C ya que el anti -Complemento puede perder su actividad. - El reactivo no aglutina los hemat es sensibilizados con fragmentos C4d. - Ning n test es capaz individualmente de detectar todos los anticuerpos cl nicamente significativos.

9 - El reactivo debe ser usado tal como se suministra, sin diluir y sin adiciones. - El reactivo ha sido formulado y validado usando tubos de vidrio. - El uso e interpretaci n de los resultados debe llevarse a cabo por personal formado y cualificado, de acuerdo con la normativa de cada pa s. REFERENCIAS - Coombs , Mourant, y Race, Lancet ii:15 (1945). - Coombs , Mourant, y Race, Brit J Exp. Path. 26:225 (1945). - Pirofsky B. American Association of Blood Banks:59 (1972). G3410-2 5.

10 6. II 1. 2. 3. el sobrenadante. Repetir la operaci n 2 veces m s. Decantar completamente tras el ltimo lavado. A adir 2 gota de Anti-globulina humana . Mezclar y centrifugar a 1000 durante 20 segundos o por una fuerza y tiempo equivalentes (Nota 2). Prueba de Coombs Directo Preparar una suspensi n de hemat es problema 3% en PBS. Depositar 1 gota de la suspensi n en un tubo de hem lisis. Proseguir seg n lo indicado en los apartados 3 al 5 del Test de Coombs Indirecto.