ANTICORPOS E IMUNOGLOBULINAS - Unesp

1 AULA: ANTICORPOS E. IMUNOGLOBULINAS . Prof. Helio Jos Montassier 1. IMUNOGLOBULINAS s o Glico-Prote nas de conforma o globular ( IMUNOGLOBULINAS ) que s o os principais mediadores da Resposta Imune Adquirida Humoral (RIH), sendo nesse caso denominadas ANTICORPOS (Acs) e que reagem especificamente com os (Ags) que estimularam a sua produ o. 2. IMUNOGLOBULINAS - podem ser encontradas sob a forma secretada em fluidos biol gicos (plasma / soro sangu neo, secre es mucosas),os chamados Acs, ou ancorados na membrana de Linf citos B (= Receptores de Linf citos B - BCR). IMUNOGLOBULINAS e ANTICORPOS . Ant genos Imunoglobulina Evolution of Recognition Molecules: The Immunoglobulin Superfamily Os ANTICORPOS s o conhecidos como gamaglobulinas por causa do seu comportamento de migra o na eletroforese de prote nas do soro . Eletroforese: processo de migra o de prote nas em um campo el trico Albumina.

2 1 2 IgG. IgD IgM IgA. Separa o por eletroforese em gel de agarose das principais fra es de proteinas do soro sangu neo, com destaque para as fra es que cont m os principais is tipos de ANTICORPOS (IgG, IgA, IgM e IgD). ANTICORPOS e IMUNOGLOBULINAS 2- Propriedades F sicas, Qu micas e Antig nicas dos Acs e Igs. Quanto Solubilidade em Solu es Saturadas de Sais Neutros (Sulfato de Am nio e Sulfato de S dio Globulinas. Carga Eletrost tica Acs e Igs tendem a apresentar cargas positivas, migrando na eletroforese na fra o gama globulina. Quanto ao e ao Tamanho Acs e Igs apresentam variando de 150 a 900 kda e coeficiente de sedimenta o variando de 7. a 19S. Estrutura Antig nica Os Acs s o prote nas e atuam como excelentes Ags e imun genos entre diferentes esp cies de animais, podendo ser usados na produ o de antissoros, que servir o para caracterizar diferentes ep topos presentes em diferentes cadeias pept dicas e regi es que comp em as mol culas de Acs/Igs.)

3 Dessa forma, foi verificado que os Acs existem sob formas diferentes de classes ou subclasses/is tipos de Igs (*Ppais. Classes s o IgG, IgM, IgA, IgD e IgE). Estrutura b sica de uma mol cula de Anticorpo ANTICORPOS e IMUNOGLOBULINAS 3- Estrutura B sica das Mol culas de Acs e Igs o molecular da Ig prot tipo de modelo para estudo - IgG. gerados por clivagem enzim tica com Papa na e Pepsina e cadeias polipept dicas liberadas por redu o e alquila o das pontes dissulfeto das mol culas de Acs/Igs. rela o entre cadeias polipept dicas liberadas por quebra das pontes dissulfeto ou dos fragmentos gerados por clivagem enzim tica na montagem de uma mol cula padr o de Ac/Ig. Polimorfismo das Igs - classes ou subclasses/is tipos de Igs (*Ppais. Classes s o IgG, IgM, IgA, IgD e IgE). - Al tipos de Igs. - Idi tipos de Igs. Separa o dos Principais Fragmentos por digest o com enzimas proteol ticas (Pepsina e Papa na) e separa o de Cadeias Polipept dicas das IMUNOGLOBULINAS /.

4 ANTICORPOS por redu o das pontes dissulfeto com B-mercaptoetanol. Rela o entre IMUNOGLOBULINAS e Linf citos B e Plasm citos Imunoglobulina Propriedades das IMUNOGLOBULINAS (BCRs) dos ANTICORPOS (Acs). Acs s o sintetizados pelos linf citos B ap s o est mulo antig nico BCRs s o sintetizados durante o desenvolvimento de linfs. B e n o dependem de est mulo antig nico BCRs - Ligados membrana Acs-Secretados Fig. 1 Estrutura da Mol cula de Anticorpo Recapitulando Estrutura do Ac Par topo Par topo Regi o de dobradi a das IMUNOGLOBULINAS Permite flexibilidade a liga o Ant genos de superf cie distantes Ant genos de superf cie pr ximos Abbas. Cellular and Molecular Immunology, 8th (2015). Fig. A Regi o da Dobradi a e a Flexibilidade dos S tios Combinat rios dos ANTICORPOS ANTICORPOS e IMUNOGLOBULINAS Conceito e Fun es dos Dom nios da Mol cula de IMUNOGLOBULINAS .

5 A) Dom nio VL-VH: Reconhecimento do Ag (S tio combinat rio /. Par topo). b) Dom nio CL e CHl: Liga o n o covalente entre as cadeias L e H;. fun o de "espa ador" entre o s tio combinat rio e Fc. c) CH2-CH2: Fixa o do componente C1q do Sistema Complemento, intera es com receptores de IMUNOGLOBULINAS da membrana de fag citos (polimorfonucleares e mononucleares). d) CH3-CH3: Citotropia para Macr fagos, Mon citos, C lulas K e Linf . citos. Citotropia Heter loga para Mast citos. Liga o n o covalente entre as cadeias H. e) CH4-CH4: Citotropia Espec fica para as Membranas de Mast citos e Bas filos, (no caso de IgE). Fun es Biol gicas dos ANTICORPOS VARIABILIDADE NA COMPOSI O DAS. CADEIAS POLIPEPT DICAS DAS Igs / Acs:- Is tipos Al tipos Idi tipos Is tipos de Cadeias polipept dicas de Igs / ANTICORPOS - IgA. - IgD. Kapa ( ) Cadeias pesadas - IgE.

6 Cadeias leves Lambda ( ) - IgG. - IgM. Principais Is tipos de IMUNOGLOBULINAS e de Acs IgM. IgD. IgA. Do m . nio sDo IgE IgG var m n i v ios eis Estrutura da mol cula de anticorpo Os ANTICORPOS se dividem em classes e subclasses de acordo com suas propriedades f sico-qu micas e antig nicas: - Solubilidade;. - Carga eletrost tica;. - Peso molecular;. - Estrutura antig nica. Principais fun es das classes de IMUNOGLOBULINAS IgM. Pentam rica Grande Cadeia J. Componente secretor Fun es Ativa o do sistema complemento Neutraliza o Aglutina o Receptor de Ag do Linfs. B adultos (BCR). Primeira Ig a ser produzida IgG. Maior concentra o no sangue Predomina nas respostas secund rias Fun es neutraliza o opsoniza o ADCC. Ativa o do sistema complemento Presente no feto e rec m-nascido IgA. Imunidade de mucosas presente nas secre es (colostro, saliva, trato respirat rio, gastrointestinal, urin rio e genital).

7 Monom rica, dim rica* (predominante). Fun o neutraliza o aglutina o IgE. Associada receptores de mast citos e bas filos Fun o resposta anti-parasit ria (helmintos). Envolvidos em processos al rgicos (rea es de hipersensibilidade do tipo I ou anafil tico). IgD. Presente na membrana de linf citos imaturos N o secretado Fun o desconhecida Veterinary Immunology - Tizard 9th Edition Veterinary Immunology - Tizard 9th Edition Figura Resumo sobre a Estrutura de todas as classes de IMUNOGLOBULINAS . Indu o da Produ o de ANTICORPOS Mudan as Qualitativas na Produ o de Acs durante as Respostas Imunes Humorais 1 e 2 . Class variation Total Ac IgM. Ac IgG Ac 1o - IgM. 2o - IgG, IgA or IgE. Ab Titer 1o Ag 2o Ag Days After Immunization Eventos Celulares na RIH Prim ria aos Ags T-dependentes Lag Clonal selection 1o Ag Log IgM. IgM.

8 Class switching IgG. Stationary Memory Cells Decline Memory Cell Pool Eventos Celulares na RIH Secund ria aos Ags T-dependentes Fase Refrat ria Cels. Na ve (Virgem) Virgin B cell IgM. Cels. Mem ria Fase Logaritmica IgG. Aumento do n Linfs. IgG, IgA ou IgE. Fase Estacion ria Memory Memory Cells Fase de Decl neo Pool Produ o Sustentada de Acs IgG. Memory Cells Fig. 11 A Transcitose de Acs nas Cels Epitelais da Mucosa do Intestino do Is tipo IgA de Acs Mediada por um Receptor de Poli-Igs Bases da Especificidade do S tio Combinat rio dos ANTICORPOS A superf cie do s tio combinat rio do Ac, especialmente ao n vel das CDRs de VH e de VL s o as partes mais importantes para conferir especificidade na intera o espec fica com cada ep topo de um Ag A forma e as cargas el tricas das CDRs de VH e de VL que consituem o s tio combinat rio de um dado Ac determinam qual o ep topo que ser ligado pelo mesmo.

9 A forma e as cargas el tricas dependem das sequ ncias de Amino cidos que comp em cada CDR. Haptenos se combinam com s tios combinat rios com a forma de fendas ou depress es. Pequenos Pept deos se combinam com s tios combinat rios com a forma de ranhuras. Prote nas / Polissacar deos grandes se combinam com uma ampla rea do s tio combinat rio Nos dom nios vari veis da cadeia leve e da pesada existem 3 regi es hipervari veis (HV), que formam as regi es determinantes de complementariedade (CDR ou RDC) e s o apresentados na superf cie de uma mol cula de anticorpo. Estas CDR formam a superf cie de liga o para o ant geno. As CDR s o ladeadas por seq ncias de amino cidos mais conservados, chamadas de regi es Framework , respons veis pela estabilidade estrutural do dom nio de liga o do ant geno Fig. 5 A estrutura e Composi o das Regi es Constantes e Vari veis de IMUNOGLOBULINAS Fig.

10 6 A composi o e a estrutura das regi es V de cadeia L e H e a presen a de regi es hipervari veis nos s tios combinat rios dos ANTICORPOS Fig. 7 As regi es hipervari veis (CDR's) constituem al as que se projetam na estrutura do s tio combinat rio das Igs Fig. 8 As For as n o covalentes que mant m Ags-Acs ligados Sum rio sobre a estrutura b sica dos Acs Recapitulando ..!!! Variabilidade da estrutura de Imunoglobulina Cadeias pesadas: , , , , . 1 Is tipo Cadeias leves: e K. 2 Al tipo: variabilidade al lica intra- esp cie. 3 Idiot po: variabilidade nas regi es hipervari veis. Albumina .. 1 2 IgG. IgD IgM IgA. Separa o por eletroforese em gel de agarose das principais fra es de proteinas do soro sangu neo, com destaque para as fra es que cont m os principais is tipos de ANTICORPOS (IgG, IgA, IgM e IgD). * A IgE n o detectada por essa t cnica de eletroforese por se encontrar em concentra es muito baixas no soro sangu neo.