Chagatest C HAI - Wiener lab.

1 870300000 / 00 P g. 1 de 4 SIGNIFICACION CLINICALa enfermedad de Chagas es una infecci n parasitaria produ-cida por el Trypanosoma cruzi . El diagn stico de laboratoriodepende del estadio en el cual se encuentre la la fase aguda, el diagn stico se efect a directamen-te mediante la comprobaci n de los par sitos en sangre o porm todos inmunol gicos que detecten anticuerpos espec la fase cr nica, se pueden usar m todos inmunol gi-cos como la reacci n de aglutinaci n de l tex, hemaglutina-ci n, aglutinaci n directa, inmunofluorescencia y ltimamen-te DEL METODOLa hemaglutinaci n indirecta (HAI), tambi n llamada hema-glutinaci n reversa pasiva, se basa en la propiedad que tie-nen los anticuerpos (que en este caso son anti-T.)

2 cruzi ) deproducir aglutinaci n espec fica en presencia de gl bulos ro-jos sensibilizados con los correspondientes ant el suero existen anticuerpos inespec ficos (heter filos) queson capaces de aglutinar gl bulos rojos de distintas espe-cies. Su presencia se investiga enfrentando el suero con GRno sensibilizados. Los anticuerpos interferentes se eliminanmediante tratamiento con PROVISTOSR econstituyente HAI: soluci n fisiol gica tamponada a pH geno HAI: liofilizado de gl bulos rojos de carnero sensi-bilizados con ant genos citoplasm ticos de T. no sensibilizados: suspensi n al 1% de eritrocitos decarnero no sensibilizados, para control de HAI: soluci n fisiol gica tamponada con fosfatos a pH7,5, con colorante n Proteica: soluci n de alb mina bovina al 10%.

3 2-Mercaptoetanol: ampolla con 2-mercaptoetanol (2-ME).Control Positivo: suero inactivado conteniendo anticuerposcontra Tripanosoma Negativo: suero no reactivo, NO PROVISTOSS oluci n fisiol PARA SU USOAnt geno HAI: preparar con 6,1 ml de Reconstituyente una hora antes de usar mezclando cada 20 minutospara permitir una correcta rehidrataci n del reactivo. Cada vezque se emplee, homogeneizar mediante agitaci n evitando laformaci n de de hemaglutinaci n indirecta para la detecci nde anticuerpos contra el Trypanosoma cruziHAIGR no sensibilizados: homogeneizar mediante agitaci nantes de usar, evitando la formaci n de de Sueros HAI: agregar 0,2 ml de Soluci n Pro-teica cada 10 ml de Buffer HAI.

4 Mezclar, rotular y : una vez abierta la ampolla, trasvasar elcontenido al frasco vac o provisto, el que se deber tapar in-mediatamente despu s de al 1%: con el 2-ME provisto, preparar unadiluci n 1/100 con soluci n fisiol gica en cantidad suficientede acuerdo al n mero de pocillos que se utilicen. Ejemplo:para 96 pocillos: 25 ul de 2-ME en 2,5 ml de soluci n fisiol Positivo y Negativo: listos para Los Reactivos Provistos son para uso diagn stico "in vitro".- Las muestras deben manipularse como si fueran capacesde transmitir la infecci Los sueros controles han sido examinados para ant geno desuperficie de hepatitis B (HBsAg) y virus de inmunodeficien-cia humana (HIV) encontr ndose no reactivos.

5 Sin embargodeben emplearse como si se tratara de material Todos los materiales empleados en el ensayo deben serdestruidos a fin de asegurar la inactivaci n de agentes pat -genos. El m todo recomendado por este procedimiento esautoclavar durante 1 hora a 121oC. Los l quidos de desechopueden ser desinfectados con hipoclorito de sodio (concen-traci n final 5%) durante por lo menos 60 No intercambiar reactivos de distintos equipos y E INSTRUCCIONES DEALMACENAMIENTOR eactivos Provistos: son estables en refrigerador (2-10oC)hasta la fecha de vencimiento indicada en la caja. No de Sueros HAI: es estable en refrigerador (2-10oC)5 d as a partir de la fecha de su preparaci al 1%: usar inmediatamente despu s geno HAI: una vez reconstituido es estable durante 2meses conservado en refrigerador (2-10oC).

6 No DE INESTABILIDAD O DETERIORO DE LOSREACTIVOS- Cuando todas las diluciones de sueros son reactivas, pue-de ser indicio de autoaglutinaci n del Ant geno HAI. Verifi-car destinando un pocillo de la policubeta para mezclarAnt geno HAI y Diluyente de Sueros HAI, sin la a n en este caso se observa aglutinaci n, el reactivoC870300000 / 00 P g. 2 de 4estar deteriorado. La ausencia de reactividad en todas las diluciones de sue-ros, puede ser indicio de deterioro de los reactivos. Proce-sar Muestra con positividad ) Recolecci n: el paciente debe estar preferentemente enayunas. Obtener suero de la manera usual.

7 No usar ) Aditivos: no se requieren. No agregar ) Sustancias interferentes conocidas: hem lisis o hiperli-pemia (con quilomicronemia) producen resultados err ) Estabilidad e instrucciones de almacenamiento: el sue-ro debe ser preferentemente fresco. En caso de no procesar-se en el momento, puede conservarse en el refrigerador (2-10oC) durante no m s de 72 hs contadas a partir del momentode la extracci n. Para per odos m s prolongados de conserva-ci n, congelar (a -20oC), evitando reiterar tal sueros envejecidos tienden a gelificarse al contacto conel 2-ME, provocando resultados falsos REQUERIDO1- Provisto- 1 frasco vac o (para trasvasar el 2-ME de la ampolla)- 5 policubetas con 96 pocillos de fondo en U- Accesorios2- No provisto- microdilutores (25 ul) o micropipetas autom ticas (25 ul)- microgoteros (25 ul)- tubos de ensayo y material volum trico adecuado- cinta adhesiva- papel de filtroRECOMENDACIONES PREVIASM icrodilutores- Acondicionamiento previo.

8 Antes de usar los microdilutores,sumergirlos en un recipiente con agua destilada y apoyar-los sobre papel de filtro para asegurar una correcta toma dela Lavado: antes de tomar una nueva muestra con los microdi-lutores, descargar el volumen residual sobre papel de pasarlos sucesivamente por dos recipientes con aguadestilada y apoyarlos sobre papel de eliminar la carga electrost tica es necesario pasar untrapo h medo por la base de la una policubeta con pocillos sin usar de fondoen TITULACION SIN 2-ME1- Con microgotero de 25 ul, colocar una gota de Dilu-yente de Sueros HAI en todos los pocillos a usar de Tomar una al cuota de cada suero a ensayar con mi-crodilutores de 25 ul (uno para cada muestra).

9 Colocarcada microdilutor en el primer pocillo y rotarlo por lomenos 10 veces para asegurar una correcta diluci n dela Realizar diluciones seriadas a partir del primer poci-llo (diluci n 1/2), pasando los microdilutores al pocillosiguiente (diluci n 1/4) y as sucesivamente hasta ladiluci n que se desea investigar (por ejemplo: 1/8, 1/16,1/32), rotando en cada paso el microdilutor por lo me-nos 10 veces para asegurar una correcta diluci n de lamuestra. Si se emplea una micropipeta autom tica de25 ul para la toma y/o diluci n de la muestra, homoge-neizar por carga y descarga. Transferir 25 ul de pocillo apocillo hasta la diluci n que se desee investigar.

10 Des-cartar los ltimos 25 Colocar en los pocillos conteniendo las diluciones 1/2y 1/4, una gota (25 ul) de GR no sensibilizados para con-trol de En el resto de los pocillos, agregar una gota (25 ul)de Ant geno Mezclar aplicando suaves golpes en los laterales dela Dejar en reposo, a resguardo de vibraciones, durante90 Leer a partir de los 90 puede aumentar la nitidez de la apreciaci n, leyen-do sobre un espejo, iluminando la placa desde arriba einterponiendo un papel blanco y trasl cido entre la poli-cubeta y la fuente de TITULACION CON 2-ME1- Colocar una gota de suero en el primer pocillo em-pleando goteros pl sticos descartables, manteni ndo-los en posici n vertical (uno por cada suero).