LDL Colesterol C Reactivo Precipitante - Wiener lab.

1 870750000 / 01 p. 1/9 Para la separaci n de las lipoprote nas de baja densidad (LDL) en sueroLDL Colesterol Reactivo PrecipitanteSIGNIFICACION CLINICAEl contenido aproximado de Colesterol en cada familia de lipoprote nas es (en % por unidad de peso): 1% en los quilomicrones, 18% en las VLDL, 50% en las LDL y 23% en las HDL. Dado que cada familia posee distinta actividad biol gica, el significado cl nico de un aumento de Colesterol depende de la o las lipoprote nas que se encuentran en otra parte, los mecanismos reguladores de los niveles plasm ticos de lipoprote nas son muy complejos y pueden ser afectados por m ltiples factores (gen ticos, ambientales, fi siol gicos o patol gicos), siendo posible encontrar valores de Colesterol total cercanos al rango normal acompa ados de alteraciones en las fracciones HDL y las LDL han sido las m s estudiadas por su im portante actividad biol gica.

2 Las LDL, producto del metabolismo de las VLDL en plasma, son las encargadas del transporte del Colesterol ex geno (y en mucho menos proporci n, end geno) hacia el interior de las c lulas; las HDL, sintetizadas en el h gado, remueven el Colesterol no utilizado por las c lulas (dentro de ciertos l mites de concen traci n), transport ndolo hacia el h gado para su degradaci estudios epidemiol gicos han confirmado que el exceso de Colesterol de LDL con respecto a un valor cr tico (1,9 g/l) debe ser considerado como factor de riesgo para el desarrollo de enfermedad card aca coronaria, considerando que el efecto protector de las HDL s lo parece tener relevan cia dentro de cierto rango de concentraciones de Colesterol circulante.

3 Tales hallazgos permiten deducir que los valores aislados de Colesterol de HDL o de LDL no pueden tomarse como ndices predictivos de riesgo, sino que es necesario conformar un perfil lip dico con los valores de Colesterol total, Colesterol de HDL y Colesterol de DEL METODOLas lipoprote nas de baja densidad (LDL o lipoprote nas) se separan del suero precipit ndolas selectivamente mediante el agregado de pol meros de alto peso molecular. Luego de centrifugar, en el sobrenadante quedan las dem s lipoprote nas (HDL y VLDL); el Colesterol ligado a las mismas se de termina empleando el sistema enzim tico Colesterol oxida sa/Peroxidasa con colorimetr a seg n Trinder (Fenol/4 AF).

4 Por diferencia entre el Colesterol total y el determinado en el sobrenadante, se obtiene el Colesterol unido a las PROVISTOSA. Reactivo A ( Reactivo Precipitante ): soluci n 1 g/l de sulfato de polivinilo disuelto en polietilenglicol (PM: 600) al 25%, pH 6, NO PROVISTOSC olestat enzim tico, Colestat enzim tico AA o Colestat enzim tico AA l quida, de Wiener PARA SU USOR eactivo A: listo para Reactivo es para uso diagn stico "in vitro".Utilizar los reactivos guardando las precauciones habituales de trabajo en el laboratorio de qu mica cl los reactivos y las muestras deben descartarse de acuerdo a la normativa local vigente. ESTABILIDAD E INSTRUCCIONES DEALMACENAMIENTOR eactivo A: estable en refrigerador (2 10oC) hasta la fecha de vencimiento indicada en la DE INESTABILIDAD O DETERIORO DE LOS REACTIVOSTodo cambio en la coloraci n u otro aspecto f sico del reac tivo, puede ser indicio de deterioro del ) Re co lec ci n: el paciente debe estar en ayunas (de 12 a 16 horas).

5 Obtener suero de la manera usual y separar del co gulo dentro de la hora de la extracci ) Adi ti vos: no se ) Sustancias interferentes conocidas: los sueros hiper trigli cerid micos (con quilomicronemia) producen sobre na dantes turbios; la bilirrubina interfiere en niveles mayores de 50 a la bibliograf a de Young para los efectos de las drogas en el presente m ) Estabilidad e instrucciones de almacenamiento: el suero debe ser preferentemente fresco. En caso de no proce sarse en el momento, puede conservarse en el refrigerador (2 10oC) durante no m s de 24 horas contadas a partir del momento de la extracci n. No REQUERIDO (no provisto) Centr fuga.

6 Espectrofot metro o fotocolor / 01 p. 2/9 Micropipetas y pipetas para medir los vol menes indicados. Tubos de kahn . Cubetas espectrofotom tricas de caras paralelas. Ba o de agua a 37oC. Reloj o un tubo de kahn , colocar:Muestra 200 ulReactivo A 100 ulHomogeneizar agitando (sin invertir) durante 20 segun dos y dejar 15 minutos en un ba o de agua a 20 25oC. Centrifugar 15 minutos a 3000 Separar inme diatamente el sobrenadante. Ver LIMITACIONES DEL el sobrenadante como Muestra para el ensayo colorim tres tubos marcados B (Blanco), S (Standard) y D (Desconocido), colocar: B S DSobrenadante 100 ulStandard 20 ul Reactivo de Trabajo 2 ml 2 ml 2 mlMezclar e incubar 5 minutos a 37oC si se usa el Reactivo de Trabajo de Colestat enzim tico AA/l quida o 15 minutos a 37oC si se usa el de Colestat enzim tico.

7 Retirar del ba o y enfriar. Leer en espectrofot metro a 505 nm o en fotocolor metro con filtro verde (490 530 nm), llevando el aparato a cero de absorbancia con el DE LOS RESULTADOSLDL Colesterol (g/l) = Colesterol total (*) (D x f) 0,624f = S(*) Valor obtenido con Colestat enzim tico o Colestat enzim tico AA/l valor 0,624 surge de: VFE VRE VS0,624 = 2 (g/l) x x x VM VRS VEdonde:VFE = volumen final del extracto = 0,3 mlVM = volumen de muestra procesada = 0,2 ml (200 ul)VRE = volumen de reacci n con el extracto = 2,1 mlVRS = volumen de reacci n con el Standard = 2,02 mlVS = volumen de Standard en la reacci n = 0,02 ml (20 ul)VE = volumen de extracto en la reacci n = 0,1 ml (100 ul)Si se emplean vol menes diferentes el factor 0,624 var a y debe ser calculado DE REFERENCIAEl panel de expertos del National Cholesterol Education Program (NCEP) provee los siguientes valores de LDL Colesterol en relaci n al riesgo de contraer enfermedad card aca coronaria (ECC): Riesgo bajo o nulo (sujetos normales).

8 Valores de LDL Colesterol menores de 1,29 g/l. Riesgo moderado a elevado (individuos con probabilidad de contraer ECC): valores entre 1,30 y 1,89 g/l. Riesgo muy elevado (individuos sospechosos de padecer ECC): valores de LDL Colesterol 1,90 obstante, es recomendable que cada laboratorio esta blezca sus propios valores de DEL PROCEDIMIENTOVer Sustancias interferentes conocidas en se procesen muestras ict ricas, deber n diluirse los sueros 1/2 1/3 con soluci n fisiol gica y emplearse el procedimiento habitual, teniendo en cuenta el factor de diluci n para los c el LDL Colesterol no puede separarse por com pleto en una centr fuga com n debido a niveles elevados de triglic ridos, puede efectuarse la determinaci n de la siguiente manera.

9 Seguir las instrucciones indicadas en PROCEDIMIENTO hasta la incubaci n en ba o de agua a 20 25oC, 15 minutos, luego colocar la mezcla de reacci n en capilares y centrifugar en centr fugas de microhematocrito, a durante 5 minutos. Cortar el capilar desechando el precipitado y utilizar el sobrenadante l mpido para la todos los casos en que los valores de Colesterol unido a HDL y VLDL (D x f, seg n los c lculos) sean superiores a 1 g/l, se debe repetir la determinaci n con los mismos sueros empleando 100 ul de muestra y 200 ul de Reactivo A. Continuar con la t cnica descripta, tomando 100 ul de sobrenadante y utilizando el factor 1,248 para los c lculos en lugar del dejar el precipitado en contacto con el sobrenadante, debido a que puede haber redisoluci n provocando valores de lecturas elevados con la consiguiente disminuci n de los valores de LDL ) Reproducibilidad: procesando replicados de una misma muestra en el d a, se obtienen los siguientes ,14 g/l 0,03 g/l2,6 %2,03 g/l 0,04 g/l2,0 %b) Linealidad: la reacci n es lineal hasta 5 ) L mite de detecci n.

10 En espectrofot metro, para una variaci n de absorbancia de 0,001 , el cambio m nimo de concentraci n detectable ser de 0,0063 g/l de SEN TA CIONPara procesar 100 muestras (C d. 1220104).BIBLIOGRAFIA Seidel, D. Ann. Clin. Biochem. 19:278 (1982).870750000 / 01 p. 3/9 Wiener lab. 2000 Rosario ArgentinaM Wiener Laboratorios 29442000 Rosario T c.: Viviana E. C tolaBioqu micaProducto Autorizado N : 1994/86 187/00 7103/08 Levy, Clin. Chem. 27/5:653 (1981). Coniglio, Acta Bioq. Clin. Latinoam. XXIII/2:201 (1989). Expert Panel of National Cholesterol Education Program JAMA 285/19:2486 (2001). Young, "Effects of Drugs on Clinical Laboratory Tests", AACC Press, 4th ed.