CK-MB - wiener-lab.com.ar

1 870320024 / 00 p. 1/12M todo de doble sensibilidad para la determinaci n de CK-MB en suero o plasmaSIGNIFICACION CLINICALa Creatina Kinasa (CK) es una enzima intramuscular consti-tuida por una subunidad M (m sculo) y otra subunidad B (brain = cerebro) que se combinan dando lugar a las isoenzimas CK-MM (muscular), CK-BB (cerebral) y CK-MB (mioc rdica).La elevaci n s rica de CK y de CK-MB constituye un indi-cador de injuria de miocardio. Luego de un infarto agudo de miocardio, en aproximadamente el 55% de los casos, el pico m ximo de elevaci n de CK y CK-MB se produce en forma simult nea, mientras que en el 45% de los casos la elevaci n m xima de CK-MB precede a la de CK DEL METODOEl esquema reaccional luego de la inhibici n espec fica de las subunidades CK-M con anticuerpos monoclonales (que inhiben tanto la isoenzima MM como las subunidades M de la CK-MB ), es el siguiente.

2 CKcreatina fosfato + ADP creatina + ATP HKATP + D-glucosa ADP + D-glucosa-6-fosfato G-6-PDHD-glucosa-6-fosfato + NADP+ 6-fosfo-D-glucono- lactona + NADPH + H+ 6-PGL6-fosfo-D-gluconolactona + H2O 6-fosfo-D-gluconato 6-PGDH6-fosfo-D-gluconato + NADP+ D-ribulosa-5-fosfato + CO2 + NADPHEl empleo de 6-fosfo-D-gluconolactonasa (6-PGL) y 6-fosfo-gluconato deshidrogenasa (6-PGDH) aumenta la sensibilidad ya que provoca la liberaci n de otra mol cula de NADPH al medio de reacci n, duplicando la se que la isoenzima CK-BB se encuentra raramente en suero y la actividad catal tica de las subunidades CK-M y CK-B pr cticamente no difiere, la actividad catal tica de la CK-MB puede calcularse de la actividad de CK-B medida, multiplicando el resultado por : hexoquinasa (levadura); G-6-PDH: glucosa-6-fosfato deshidrogenasa (microbiana); 6-PGL: 6-fosfo-D-glucono-lactonasa (microbiana).

3 6-PGDH: 6-fosfogluconato deshi-drogenasa (levadura); ATP/ADP; adenosina 5 tri/difosfato; NADH: nicotinamida-adenina dinucle tido reducida; NAD+: nicotinamida-adenina dinucle PROVISTOSA. Reactivo A: viales para determinaciones individuales con-teniendo cantidades suficientes para obtener las siguientes concentraciones una vez reconstituidos:creatina fosfato ..30 mmol/lADP ..2 mmol/lglucosa ..20 mmol/lNADP ..2 mmol/lhexoquinasa (HK) .. 2500 U/lglucosa-6-fosfato deshidrogenasa (G-6-PDH) .. 2000 U/lacetato de magnesio.

4 10 mmol/lAMP ..5 mmol/ldi-(adenosina-5') pentafosfato ..10 umol/lN-acetilciste na (NAC) ..20 mmol/l6-fosfogluconolactonasa (6-PGL) .. 200 U/l6-fosfogluconato deshidrogenasa (6-PGDH) .. 400 U/lAnticuerpos monoclonales capaces de inhibir 1000 U/l de CK-M (a 25oC) o 2000 U/l de CK-M (a 37oC).B. Reactivo B: soluci n de buffer imidazol 100 mmol/l; pH 6, : vial con te nien do CK-MB de origen humano, lio fi li-za da (ver ta bla ad jun ta pa ra va lor te ri co).INSTRUCCIONES PARA SU USOR eactivo A: agregar 2,5 ml de Reactivo B a un vial de Reac-tivo A.

5 Tapar y agitar hasta disoluci n B: listo para : abrir el vial teniendo la precauci n de no perder material. Pipetear exactamente 1 ml de agua destilada. Tapar y esperar 5 minutos. Disolver el contenido completamente por inversi n del vial. El Control de CK-MB reconstituido se trata de la misma manera que una muestra reactivos son para uso diagn stico "in vitro".No ingerir. Evitar el contacto con piel y ojos. En caso de derrame o salpicaduras, lavar con abundante agua la zona Reactivo B contiene Control ha sido examinado para HIV, HCV y HBV encon-tr ndose no reactivo.

6 No obstante, debe ser empleado como si se tratara de material infectivo. Utilizar los reactivos guardando las precauciones habituales de trabajo en el laboratorio de an lisis cl los reactivos y las muestras deben descartarse de acuerdo a la normativa local E INSTRUCCIONES DEALMACENAMIENTOR eactivos Provistos: estables en refrigerador (2-10oC) hasta la fecha de vencimiento indicada en la A reconstituido: en refrigerador (2-10oC) es estable 7 d as a partir del momento de su reconstituci reconstituido: estable 3 d as a 2-10oC, o 3 meses congelado (-20oC).

7 No congelar y descongelar DS MONOCLONALC870320024 / 00 p. 2/12 INDICIOS DE INESTABILIDAD O DETERIORO DE LOSREACTIVOSLa dificultad en obtener los valores de los controles dentro del rango asignado es indicio de deterioro de los Reactivos. En tal caso, el espectrofot metro ha sido llevado a 0 con agua destilada, lecturas de Absorbancia del Reactivo A reconstituido > 0,800 (a 340 nm) son indicio de deterioro del o plasmaa) Recolecci n: obtener de la manera ) Aditivos: en el caso de que la muestra a emplear sea plas-ma, debe usarse heparina o EDTA como anticoagulante.

8 Se recomienda el empleo de Anticoagulante W de wiener ) Sustancias interferentes conocidas: los sueros con hem lisis visible o intensa, producen valores falsamente aumentados, por lo que no deben ser se observan interferencias por hemoglobina hasta 50 mg/dl, bilirrubina hasta 2,5 mg/dl (25 mg/l) y heparina hasta 20 a la bibliograf a de Young para los efectos de las drogas en el presente m ) Estabilidad e instrucciones de almacenamiento: la muestra debe ser fresca. En caso de no procesarse en el mo-mento, puede ser conservada 12 horas a temperatura ambiente (<25oC), 3 d as refrigerada (2-10oC) o 1 mes congelada (-20oC).

9 MATERIAL REQUERIDO (no provisto)- Espectrofot Micropipetas y pipetas para medir los vol menes Ba o de agua a la temperatura indicada en Cron DE REACCION- Longitud de onda: 340 nm (Hg 334 366).- Temperatura de reacci n: 25, 30 Tiempo de reacci n: 10 minutos- Vol menes de muestra y reactivo: pueden variarse propor-cionalmente (ej. 40 ul muestra + 1 ml Reactivo A reconstituido o 20 ul muestra + 500 ul Reactivo A reconstituido).PROCEDIMIENTOL levar el aparato a cero con agua destilada. Ver INDI-CIOS DE INESTABILIDAD O DETERIORO DE LOS REACTIVOS.

10 En una cubeta mantenida a la temperatura seleccionada (25, 30 37oC) colocar:Reactivo A reconstituido 2,5 mlPreincubar unos minutos. Luego agregar:Muestra 100 ulMezclar inmediatamente por inversi n. Esperar 5 mi-nutos. Ajustar la absorbancia a un valor de referencia y disparar simult neamente el cron metro. Registrar la absorbancia cada minuto, durante 5 minutos. Determi-nar la diferencia promedio de absorbancia/min ( A/min) restando a cada lectura la anterior y promediando los valores. Utilizar este promedio para los c DE LOS RESULTADOSCK-MB (U/l) = A/min x factorMedida a 340 nm: CK-MB (U/l) = A/min x a Hg 334: CK-MB (U/l) = A/min x a Hg 366: CK-MB (U/l) = A/min x factores arriba mencionados ya contemplan la correcci n necesaria para convertir el valor de CK-B en DE CONTROL DE CALIDADP rocesar un material de control de calidad (Control CK-MB ) con actividades conocidas de CK-MB , con cada determi-naci n.