Total Protein - Wiener lab.

1 867029122 / 00 p. 1/9M todo colorim trico para la determinaci n de prote nas totales en suero y plasmaTotal Protein SIGNIFICACION CLINICALas prote nas son compuestos org nicos macromoleculares, ampliamente distribuidos en el organismo, esenciales para la vida. Act an como elementos estructurales y de transporte y aparecen bajo la forma de enzimas, hormonas, anticuerpos, factores de coagulaci n, el plasma, las prote nas contribuyen a mantener el vo-lumen del fluido circulante, transportan sustancias relativa-mente insolubles y act an en la inactivaci n de compuestos t xicos y en la defensa contra agentes determinaci n de prote nas totales es til para el monitoreo de cambios ocasionados por diversos estados de enfermedad. En condiciones patol gicas como p rdidas renales, desnutri-ci n, infecciones prolongadas, etc., suelen presentarse hipo-proteinemias, mientras que en otras como mieloma m ltiple, endocarditis bacteriana y hemoconcentraci n de diversos or genes, (ej.)

2 : deshidrataci n) se observan DEL METODOEn medio alcalino, los enlaces pept dicos de las prote -nas reaccionan con el i n c prico formando el complejo violeta-p rpura del biuret. La intensidad de absorci n de este complejo a 540 nm es directamente proporcional a la concentraci n de las prote nas totales en la muestra. El tartrato de sodio y potasio presente en el reactivo, inhibe la formaci n de hidr xido de cobre, evitando as su preci-pitaci n. El ioduro de potasio previene la reducci n del i n c prico a xido cuproso. Medio alcalinoProte nas (enlace pept dico) + Cu+2 complejo Cu-Prote naREACTIVOS PROVISTOSA. Reactivo A: hidr xido de sodio, 600 mmol/L; tartrato s dico-pot sico 127,6 Reactivo B: hidr xido de sodio, 600 mmol/L; tartrato s dico-pot sico 127,6 mmol/L; ioduro pot sico 120 mmol/L; sulfato de cobre 48,9 NO PROVISTOS- Calibrador A plus de Wiener Soluci n fisiol gica (NaCl 9 g/L).INSTRUCCIONES PARA SU USOR eactivos Provistos: listos para reactivos son para uso diagn stico "in vitro".

3 Los Reactivos Provistos son corrosivos. RH315 + H320: Provoca irritaci n cut nea y ocular. H314: Provoca quema-duras graves en la piel y lesiones oculares graves. P262: Evitar el contacto con los ojos, la piel o la ropa. P305 + P351 + P338: EN CASO DE CONTACTO CON LOS OJOS: Enjuagar cuidadosamente con agua durante varios minutos. Quitar las lentes de contacto, si lleva y resulta f cil. Seguir enjuagando. P302 + P352: EN CASO DE CONTACTO CON LA PIEL: Lavar con agua y jab n abundantes. P280: Llevar guantes/prendas/gafas/m scara de protecci los reactivos guardando las precauciones habituales de trabajo en el laboratorio de qu mica cl los reactivos y las muestras deben descartarse de acuerdo a la normativa local vigente. ESTABILIDAD E INSTRUCCIONES DEALMACENAMIENTOR eactivos Provistos: estables en refrigerador (2-10oC) hasta la fecha de vencimiento indicada en la vez abiertos, no deben permanecer destapados ni fuera del refrigerador por per odos observarse una ligera alteraci n del color del Reactivo B sin cambios en el desempe o del mismo.

4 Evitar de la o plasmaa) Recolecci n: obtener la muestra de la manera ) Aditivos: en caso de emplear plasma como muestra, se recomienda el uso de heparina o EDTA (Anticoagulante W de Wiener lab.) como ) Sustancias interferentes conocidas: no se observan interferencias por dextr n hasta 30 g/L, hemoglobina hasta 750 mg/dL, triglic ridos hasta 4000 mg/dL, ni bilirrubina hasta 20 mg/dL (200 mg/L). Las muestras que poseen precipitados deben ser centrifu-gadas previo a su a la bibliograf a de Young para los efectos de las drogas en el presente m ) Estabilidad e instrucciones de almacenamiento: la muestra debe ser preferentemente fresca. Puede conser-varse hasta una semana en refrigerador (2-10oC) o 6 meses a -20oC. MATERIAL REQUERIDO (no provisto) - Micropipetas para medir los vol menes indicados. - Analizador autom ticoC867029122 / 00 p. 2/9 PROCEDIMIENTO(Analizador autom tico)A continuaci n se detalla un procedimiento general para Total Protein en un analizador autom tico.

5 Cuando se implemente la t cnica en un analizador en particular, siga las instrucciones de trabajo del mismo. En una cubeta mantenida a la temperatura elegida, colocar:Muestra o Calibrador 3 uLReactivo A 120 uLIncubar durante 120 segundos a 37oC. Leer a 540 nm de longitud de onda primaria y 700 nm de longitud de onda B 40 uLIncubar durante 300 segundos a 37oC. Leer a 540 nm de longitud de onda primaria y 700 nm de longitud de onda analizadores Wiener lab. calculan autom ticamente la concentraci n del analito de cada Calibrador A plus es procesado de la misma manera que las muestras y a partir de l se calcula el factor correspon-diente. Los valores de concentraci n de prote nas totales son variables lote a lote. Consultar los valores en el manual de instrucciones de Calibrador A plus de Wiener DE CONTROL DE CALIDADP rocesar 2 niveles de un material de control de calidad (Standatrol S-E 2 niveles) con concentraciones conocidas de prote nas totales, con cada determinaci DE REFERENCIAA dultos: 6,4 - 8,3 g/dL (64 - 83 g/L) Sangre de cord n: 4,8 - 8,0 g/dL (48 - 80 g/L)Prematuros: 3,6 - 6,0 g/dL (36 - 60 g/L)Neonatos: 4,6 - 7,0 g/dL (46 - 70 g/L)1 semana: 4,4 - 7,6 g/dL (44 - 76 g/L)7 meses -1 a o: 5,1 - 7,3 g/dL (51 - 73 g/L)1-2 a os: 5,6 - 7,5 g/dL (56 - 75 g/L)> 3 a os 6,0 - 8,0 g/dL (60 - 80 g/L) Estos valores son s lo orientativos.

6 Se recomienda que cada laboratorio establezca sus propios intervalos de referencia, dentro de su poblaci n de pacientes. CONVERSION DE UNIDADES AL SISTEMA SIProte nas totales (g/dL) x 10 = Prote nas totales (g/L)LIMITACIONES DEL PROCEDIMIENTOVer Sustancias interferentes conocidas en preservar la integridad de los reactivos deben evitarse todo tipo de contaminaciones, empleando para la medici n nicamente micropipetas perfectamente limpias y recomienda utilizar Standatrol S-E 2 niveles de Wiener lab, como material de control de calidad, ya que con controles de otras marcas comerciales pueden obtenerse valores dife-rentes al rango especificado, dado que los mismos dependen del m todo o sistema ) Precisi n: basado en el protocolo EP5-A2 del CLSI, se obtuvieron los siguientes coeficientes de variaci n como estimadores de la precisi n intraensayo (CVi) y Total (CVt):NivelCVwr CVt 4,4 g/dL0,36%0,96%6,7 g/dL0,65%1,16%7,3 g/dL0,57%0,88%b) Linealidad: la linealidad se evalu utilizando un protocolo basado en el EP6-A de la CLSI.

7 La reacci n es lineal hasta 12 g/dL. Para valores superiores, diluir la muestra 1+4 partes con soluci n fisiol gica (NaCl 9 g/L), repetir la determinaci n y multiplicar el resultado por el factor de diluci ) L mite de cuantificaci n: se evalu utilizando un protoco-lo basado en el EP17-A de la CLSI. El l mite de cuantificaci n es de 2,5 g/dL. PARAMETROS PARA ANALIZADORES AUTOMATICOSPara las instrucciones de programaci n consultar las adap-taciones correspondientes a los analizadores de la l nea Wiener lab. para el m todo Total Protein . Para la calibraci n debe utilizarse Calibrador A plus de Wiener 3 x 125 mL Reactivo A1 x 125 mL Reactivo B(C d. 1999736)BIBLIOGRAFIA- Doumas, B; Bayse, D; Carter, R; Peters, T schaffer, A candidate reference method for determination of Total pro-tein in serum. I. development and validation. - Clin. Chem. 27/10:1642, Glick, M; Ryder, K; Jackson, S. - Graphical comparisons of interferences in clinical chemistry instrumentation.

8 - Clin. Chem. 32:470, Young, - "Effects of Drugs on Clinical Laboratory Tests", AACC Press, 4th ed., Tholen, D; Kallner, A; Kennedy, J; Krouwer,J; Meier, K. - Eva-luation of precision of quantitative measurement methods; Approved Guideline - Second Edition. Vol. 24 N 25, Tholen, D; Kroll, M; Astles, J; Happe, T; Krouwer, J; Las-ky, F. EP6-A. - Evaluation of the Linearity of quantitative Measu-rement Procedures: A Statical approach; Aproved Guideline. - Vol. 23 N 16, Tholen, D; Linnet, K; Kondratovich, M; Armbruster, D; Garret, P; Jones, R; Kroll, M; Lequin, R; Pankratz, T; Scassellati, G; Schimmel, H; Tsai, J. EP17-A. - Protocols for Deter-mination of Limits of Detection and Limits of Quantitation; Approved Guideline. - Vol. 24 N 34, / 00 p. 3/92000 Rosario - ArgentinaWiener lab. M Wiener Laboratorios 29442000 - Rosario - T c.: Viviana E. C tolaBioqu micaProducto Autorizado mbolosLos siguientes s mbolos se utilizan en todos los kits de reactivos para diagn stico de Wiener lab.

9 CEste producto cumple con los requerimientos previstos por la Directiva Europea 98/79 CE de productos sanitarios para el diagn stico "in vitro"VUso diagn stico "in vitro"XContenido suficiente para <n> ensayosHFecha de caducidadlL mite de temperatura (conservar a)No congelarFRiesgo biol gicoVolumen despu s de la reconstituci nContenidogN mero de lotehN mero de cat logoCalibradorbControlbControl PositivocControl NegativoiConsultar instrucciones de usoMElaborado por:NocivoCorrosivo / C usticoIrritantePRepresentante autorizado en la Comunidad Europea