Antígenos Febriles C - Wiener lab.

1 870090000 / 00 p. 1/6 SIGNIFICACION CLINICALas Salmonellas se consideran pat genos ent ricos obliga-dos. Los alimentos y el agua contaminados son los meca-nismos de transmisi n. La enfermedad puede presentarse como gastroenteritis, septicemia con lesiones en diversos rganos o fiebre Brucelosis se presenta en la mayor a de los casos con anorexia, fiebre, decaimiento y escalofr os, pudiendo apare-cer luego complicaciones importantes como son las seas y neurops pesar de que el m todo definitivo para establecer la etio-log a de estas enfermedades es a trav s del aislamiento del agente pat geno.

2 Esto resulta dif cil debido a que la investigaci n se realiza frecuentemente en per odos tard os de la enfermedad y luego de una terapia antibi tica. Por este motivo es de gran importancia diagn stica la detecci n de los anticuerpos espec ficos producidos en el curso de cada una de estas patolog as. Una prueba aislada es de escaso valor, siendo necesarias 2 o m s pruebas seriadas a fin de poner en evidencia cambios en el t tulo de DA MEN TOS DEL ME TO DOEl suero del paciente se pone en contacto con ant genos espec ficos. En este caso se utilizan suspensiones de Sal-monellas o Brucellas muertos.

3 Si la muestra contiene los anticuerpos correspondientes se producir una aglutinaci n visible macrosc AC TI VOS PRO VIS TOSAnt genos Febriles Salmonella: suspensi n en soluci n salina con conservantes apropiados, conteniendo los si-guientes ant genos bacterianos:- Ant genos Paratyphoid A (Salmonella, ant geno flagelar a).- Ant genos Paratyphoid B (Salmonella, ant geno flagelar b).- Ant genos Typhoid H (Salmonella, ant geno flagelar d).- Ant genos Typhoid O (Salmonella, ant geno som tico D).Ant genos Febriles Brucella: suspensi n de ant genos bacterianos (Brucella abortus, cepa 1119-3) en soluci n fisiol gica con conservantes apropiados.

4 La concentraci n celular de los ant genos se encuentra entre el 4 y el 6%. Las bacterias utilizadas se encuentran en fase genos Febriles Controles:- Control Positivo: diluci n de suero humano inactivado Control Negativo: diluci n de suero humano AC TI VOS NO PRO VIS TOSS oluci n fisiol genos Febriles Reactivos para la determinaci n de anticuerpos espec ficos contra Salmonella y BrucellaINS TRUC CIO NES PA RA SU USOLos reactivos se proveen listos para usar. Llevar a tempera-tura ambiente y agitar vigorosamente antes de su CAU CIO NESLos reactivos son para uso diagn stico "in vitro".

5 Los controles han sido examinados para HIV, HCV y HBV encontr ndose no reactivos. No obstante, deben ser em-pleados como si se tratara de material los reactivos guardando las precauciones habituales de trabajo en el laboratorio de an lisis cl los reactivos y las muestras deben descartarse de acuerdo a la normativa local TA BI LI DAD E INS TRUC CIO NES DEAL MA CE NA MIEN TOReactivos Provistos: estables en refrigerador (2-10oC) has-ta la fecha de vencimiento indicada en la caja. No DI CIOS DE INES TA BI LI DAD O DE TE RIO RO DE LOS RE AC TI VOSC ualquier contaminaci n bacteriana de los reactivos produ-cida durante el uso puede ser causa de deterioro.

6 Recolecci n: debe obtenerse suero l mpido en forma est ril. No inactivar ni calentar ya que los anticuerpos son termol ) Aditivos: no se ) Sustancias interferentes conocidas: la hem lisis visible y los quilomicrones pueden dar reacciones inespec ) Estabilidad e instrucciones de almacenamiento: las muestras pueden conservarse 7 d as en refrigerador (2-10oC).MATERIAL REQUERIDO (no provisto)- Placa de vidrio- Micropipetas- Tubos de hem lisis- Varilla- Reloj o timerPROCEDIMIENTOI- TECNICA RAPIDA EN PLACAC olocar en una placa una gota (50 ul) de suero y agregar una gota (50 ul) de suspensi n de Ant geno.

7 C870090000 / 00 p. 2/6 Mezclar y agitar la placa en forma circular durante 2 la presencia o ausencia de aglutinaci n utili-zando una luz indirecta sobre fondo TITULACION RAPIDA EN PLACA1) Dividir una placa de vidrio en sectores de 4 cm2 ) Empleando las micropipetas apropiadas colocar en estos sectores 80 ul, 40 ul, 20 ul, 10 ul y 5 ul de suero l mpido. Repetir el procedimiento para un control negativo y uno ) Colocar 1 gota de Ant geno previamente agitado sobre cada gota de ) Mezclar el suero y el Ant geno utilizando una varilla abarcando un rea de 2 cm de di metro aproximada-mente.

8 Debe emplearse una varilla distinta para cada diluci n de suero o la misma varilla mezclando a partir de la muestra m s ) Agitar la placa durante 2 minutos en forma ) Observar la aglutinaci n utilizando luz indirecta sobre fondo DE LOS RESULTADOS4+: todos los microorganismos +: aglutinan aproximadamente el 75%.2+: aglutinan aproximadamente el 50%.1+: aglutinan aproximadamente el 25%.Negativo: no aparece aglutinaci cnica I: se indica solamente positivo o cnica II: el t tulo se considerar la ltima diluci n que da aglutinaci n del 50% (++).Los resultados obtenidos en la titulaci n en placa se aproxi-man a los de la prueba en tubo descripta en Bennett, (ver Bibliograf a), considerando las diluciones como se muestra a continuaci n:Volumen de SueroDiluci n aproximada en(ml)la prueba en tubo0,081:200,041:400,021:800,011:1600,0 051:320 METODO DE CONTROL DE CALIDADAnt genos Febriles DE REFERENCIAG eneralmente t tulos de 1:40 1:80 son sospechosos de enfermedad.

9 S lo t tulos mayores de 1:80 pueden consi-derarse probatorios de diagn stico de enfermedad cuando est n acompa ados de la sintomatolog a cl nica. T tulos mayores de 1:320, son DEL PROCEDIMIENTOVer Sustancias interferentes conocidas en tulos significativos pueden obtenerse en individuos inmuni-zados por vacunas tifoideas. Pueden observarse reacciones inespec ficas con ant genos de Salmonella O grupo D en suero de pacientes con n se encontraron reacciones inespec ficas en pacien-tes con enfermedad hep tica cr nica activa y consumidores de narc ant genos de Brucella pueden dar reacciones cruzadas en individuos vacunados contra c genos Febriles Salmonella: en un estudio realizado sobre 191 muestras, comparando con otro m todo de simi-lar fundamento tomado como referencia, se obtuvieron los siguientes resultados:Salmonella Paratyphoid A:Sensibilidad: 94,1%Especificidad.

10 98,8%Salmonella Paratyphoid B:Sensibilidad: 89,3%Especificidad: 100%Salmonella Typhoid H:Sensibilidad: 86,2%Especificidad: 99,3%Salmonella Typhoid O:Sensibilidad: 95%Especificidad: 99,1%Ant genos Febriles Brucella: en un estudio realizado so-bre 203 muestras comparando con otro m todo de similar fundamento tomado como referencia, se obtuvieron los siguientes resultados:Sensibilidad: 100%Especificidad: 100%Debe tenerse en cuenta que debido a las limitaciones de este tipo de reacciones serol gicas, el m todo no sustituye el aislamiento e identificaci n del agente etiol SEN TA CIONS almonella (C d.)