Ca-Color - Wiener lab.

1 870240122 / 00 p. 1/9 Para la determinaci n de calcio s rico y urinarioSIGNIFICACION CLINICAEl calcio es esencial en la mayor a de las reacciones de la coagulaci n sangu nea y en la regulaci n de la excitabilidad de las fibras musculares. Su concentraci n en suero y orina est regulada por la acci n de factores tales como niveles de parathormona, vitamina D y f sforo, observ ndose fluctuacio-nes fisiol gicas debidas a edad, sexo, embarazo, actividad f sica, cambios estacionales (por acci n de la luz solar).La hipercalcemia est relacionada con distintas patolog as: hiperparatiroidismo, neoplasias seas, intoxicaciones con vita-mina D. La hipocalcemia se asocia con des rdenes tales como hipoparatiroidismo, deficiencia de vitamina D, malabsorci DEL METODOEl calcio reacciona con la cresolftale n complexona (cfx) a pH 11, dando un complejo de adici n color magenta que se mide fotocolorim tricamente a 570 PROVISTOSA. Reactivo A: soluci n de cresolftale n complexona 3,7 Reactivo B: soluci n de aminometil propanol (AMP) 0,2 mol/l en metanol 35% V/V para pH final Standard: soluci n de calcio 10 NO PROVISTOSAgua PARA SU USOR eactivos Provistos: listos para : cada vez que se use, transferir una cantidad en exceso a un tubo limpio y pipetear de all el volumen nece-sario, descartando el reactivos son para uso diagn stico "in vitro".

2 Reactivo B: irritante. H302 + H332: Nocivo en caso de ingesti n o inhalaci n. P262: Evitar el contacto con los ojos, la piel o la ropa. P305 + P351 + P338: EN CASO DE CONTACTO CON LOS OJOS: Enjuagar cuidadosamente con agua durante varios minutos. Quitar las lentes de contacto, si lleva y resulta f cil. Seguir enjuagando. P302 + P352: EN CASO DE CONTACTO CON LA PIEL: Lavar con agua y jab n abundantes. ESTABILIDAD E INSTRUCCIONES DEALMACENAMIENTOR eactivos Provistos: son estables a temperatura am-biente (< 25 C) hasta la fecha de vencimiento indicada en la DE INESTABILIDAD O DETERIORO DE LOS REACTIVOSCa-Color se caracteriza por presentar Blancos m s bajos que todos los sistemas similares que usan Cfx u otros indicadores de calcio. Absorbancias altas de los Blancos son indicio de contaminaci n con calcio. Desechar cuan-do las lecturas de los Blancos sean mayores o iguales a 0,300 u orinaa) Recolecci n:- Suero: obtener de la manera Orina: recolectar orina de 24 horas sobre 20 ml de cido clorh drico al 50%.

3 Llevar a 2 litros con agua y ) Aditivos: si la muestra a emplear es orina, se debe aci-dificar con cido clorh drico al 50% durante su recolecci ) Sustancias interferentes conocidas: los anticoagulantes complejan al calcio produciendo resultados err interfieren: prote nas hasta 15 g/dl, fosfatos hasta 5 g/l, bili-rrubina hasta 200 mg/l, hem lisis intensa o lipemia hasta 15 a la bibliograf a de Young para los efectos de las drogas en el presente m ) Estabilidad e instrucciones de almacenamiento: la muestra debe ser preferentemente fresca. Puede conservar-se una semana en refrigerador (2-10oC) o m s de 5 meses en el congelador, sin agregado de REQUERIDO (no provisto)- Espectrofot metro o fotocolor Micropipetas y pipetas capaces de medir los vol menes Tubos o cubetas espectrofotom DE REACCION- Longitud de onda: 570 nm en espectrofot metro o 560-590 nm en fotocolor metro con filtro Temperatura de reacci n: temperatura ambiente (15-25oC).

4 - Volumen de muestra: 20 ul- Volumen final de reacci n: 3,57 mlLos vol menes de muestra y de reactivos pueden disminuirse o aumentarse proporcionalmente. (Ej.: 25 ul de Reactivo A + 1,75 ml de Reactivo B + 10 ul de Muestra). Ca-Color 870240122 / 00 p. 2/9En una poblaci n de 120 individuos sanos, provenientes de la ciudad de Rosario (Argentina), de ambos sexos (entre 20 y 45 a os), con una ingesta restringida en calcio, se encontr :Orina: 60 - 200 mg/24 hsSe recomienda que cada laboratorio establezca sus propios valores de DEL PROCEDIMIENTOVer Sustancias interferentes conocidas en : el material a utilizar debe estar riguro-samente limpio, libre de calcio y de toda traza de anticoa-gulante. Para ello aconsejamos lavar con detergentes no i nicos (Noi n de Wiener lab.) o cidos minerales diluidos, efectuando un enjuague final con agua aconseja separar pipetas y tubos de fotocolor metro para uso exclusivo de esta determinaci ) Reproducibilidad: procesando replicados de las mismas muestras en un mismo d a, se obtuvieron los siguiente mg/dl 0,12 mg/dl1,7 %10 mg/dl 0,11 mg/dl1,1 %15 mg/dl 0,10 mg/dl0,68 %b) Recuperaci n: agregando cantidades conocidas de calcio a distintos sueros, se obtuvo una recuperaci n entre 97,5 y 101% para todo nivel de calcio ) Linealidad: la reacci n es lineal hasta 20 mg/dl.

5 Para valores superiores, repetir la determinaci n empleando 10 ul de Muestra o muestra diluida al 1:2 con soluci n fisiol gica y multiplicar por 2 el resultado n el aparato empleado, la reacci n puede no cumplir la ley de Beer. Por esta raz n, debe constatarse la respuesta del sistema mediante una curva de calibraci n preparada con 20 y 40 ul de Standard, procesados de la manera indicada en el PROCEDIMIENTO. La lectura corregida del segundo tubo de la curva (20 mg/dl) no debe diferir en m s del 5% del valor calculado en base al primer tubo (10 mg/dl), si la respuesta es casos de desv os (positivos o negativos) superiores al 5%, debe emplearse la curva de calibraci n para los c ) Comparaci n con m todos de referencia: procesando distintas muestras, con Ca-Color y con otro m todo tomado como referencia, y comparando los resultados obtenidos por ambos m todos se observa que:1- Tomando el m todo de absorci n at mica como referencia (propuesta por el National Bureau of Standards), los resul-tados obtenidos muestran una correlaci n satisfactoria, con un coeficiente de correlaci n = 0, Tomando el m todo de Clark y Collip como referencia, se demuestra que los resultados son estad sticamente iguales, con una diferencia promedio menor de 0,2 60 -145 determinaciones (C d.

6 1152001).PROCEDIMIENTOSe aconseja trabajar directamente en tubos o cubetas espectrofotom tricas, de manera de poder determinar un Blanco interno para cada ensayo, condici n indispensable para controlar las trazas de calcio que pudieran haber escapado al proceso de lavado del dos tubos marcados S (Standard) y D (Desconocido) colocar: S DReactivo A 50 ul 50 ulReactivo B 3,5 ml 3,5 mlMezclar y leer la absorbancia de ambos tubos (Blancos internos: BS y BD) en espectrofot metro a 570 nm o en fotocolor metro con filtro rojo (560-590 nm) llevando el aparato a cero con agua destilada. Agregar:Standard 20 ul -Muestra - 20 ulMezclar inmediatamente. Despu s de 10 minutos, volver a leer (So y Do).ESTABILIDAD DE LA MEZCLA DE REACCION FINALEl color de reacci n final es estable 3 horas, por lo que la absorbancia debe ser le da dentro de este DE LOS RESULTADOSC orregir las lecturas restando los Blancos internos corres-pondientes:So - BS = SDo - BD = D 10 mg/dl1) Calcio s rico (mg/dl) = D x f f = S D2) Calcio urinario (mg/24 hs) = x 200 mg/24 hs SCONVERSION DE UNIDADESCa (mg/dl) = Ca (mmol/l) x 4Ca (mmol/l) = Ca (mg/dl) x 0,25Ca (mg/dl) = Ca (mEq/l) x 2Ca (mEq/l) = Ca (mg/dl) x 0,5 METODO DE CONTROL DE CALIDADSi la muestra a ensayar es suero, procesar 2 niveles de un material de control de calidad (Standatrol S-E 2 niveles) con concentraciones conocidas de calcio, con cada deter-minaci DE REFERENCIAS uero: 8,5 - 10,5 mg/dlOrina: hasta 300 mg/24 hs (para una dieta normal)870240122 / 00 p.

7 3/9 BIBLIOGRAFIA- Martinek, - J. Am. Med. Techn. 33:416 (1971).- Rojk n, M. L. y Mariani, de - Bioqu m. Cl n. VII/4:405 (1973).- Lorenzo, ; Drappo, - 1o Congreso Argentino de Osteolog a y Metabolismo Mineral - Rosario (1984).- Drappo, G.; Lorenzo, L.; - Revista ABA No 239 p g. 230, Young, - "Effects of Drugs on Clinical Laboratory Tests", AACC Press, 4th ed., Burtis C., Ashwood, E. - Tietz Texbook of Clinical Chemistry, WB Saunders Co., 3 ed, Rosario - ArgentinaM Wiener Laboratorios 29442000 - Rosario - T c.: Viviana E. C tolaBioqu micaProducto Autorizado Disp. N : 252/75-7434-98UR161013 Wiener siguientes s mbolos se utilizan en todos los kits de reactivos para diagn stico de Wiener lab. CEste producto cumple con los requerimientos previstos por la Directiva Europea 98/79 CE de productos sanitarios para el diagn stico "in vitro"PRepresentante autorizado en la Comunidad EuropeaVUso diagn stico "in vitro"XContenido suficiente para <n> ensayosHFecha de caducidadlL mite de temperatura (conservar a)No congelarFRiesgo biol gicoVolumen despu s de la reconstituci nContenidogN mero de loteMElaborado por:NocivoCorrosivo / C usticoIrritanteiConsultar instrucciones de usoCalibradorControlbbControl PositivocControl NegativohN mero de cat logo Calibr.

8 Cont.