Creatinina - Wiener lab.

1 870420022 / 00 p. 1/12 SIGNIFICACION CLINICALa Creatinina , compuesto sumamente difusible, se elimina del organismo casi exclusivamente por filtraci n determinaci n en suero, as como el clearance de crea-tinina end gena constituyen par metros importantes para el diagn stico de diversas afecciones renales. Sin embargo, debido a los problemas pr cticos inherentes a la determi-naci n del clearance (recolecci n de orina en ni os, etc.), la determinaci n de Creatinina s rica es m s utilizada como ndice de funcionalismo DEL METODOLa Creatinina y otros compuestos de la muestra reaccionan con el cido p crico en medio alcalino dando un complejo color rojo que se cuantifica mediante lectura fotom determinaci n de Creatinina puede llevarse a cabo por medio de una t cnica de punto final, o por una t cnica cin tica elimin ndose en ambas el color que se debe a los crom genos no el primer caso, la adici n de cido al medio.

2 Destruye el picrato de Creatinina pero no el color formado por los de-m s compuestos. Por lo tanto la diferencia entre la lectura fotom trica antes y despu s del agregado de cido, permite cuantificar la Creatinina en forma espec la t cnica cin tica, los crom genos no Creatinina , reac-cionan dentro de los primeros 30 segundos de iniciada la reacci n, que se comporta como cin tica de primer orden para la Creatinina . De manera que entre los 30 segundos y los 5 minutos posteriores al inicio de la reacci n, el incremento de color se debe exclusivamente a la PROVISTOSA.

3 Reactivo A: soluci n de cido p crico 41,4 Reactivo B: soluci n 0,4% de polioxietil n lauril ter (PLE) en buffer alcalino, pH 12, Reactivo C: cido ac tico al 20%.S. Standard: soluci n de Creatinina 20 PARA SU USOS tandard: listo para A: listo para B: listo para usar. Es posible que a bajas tempera-turas se produzca turbidez o alg n sedimento. En tal caso, solubilizar totalmente el reactivo dej ndolo unos minutos en ba o a 37oC antes de C: listo para de Trabajo: mezclar en frasco pl stico partes iguales de Reactivo A y Reactivo B.

4 Rotular y reactivos son para uso diagn stico "in vitro".Reactivos B y C: corrosivos. H315 + H320: Provoca irritaci n cut nea y ocular. H314: Provoca quemaduras graves en la piel y lesiones oculares graves. P262: Evitar el contacto con los ojos, la piel o la ropa. P305 + P351 + P338: EN CASO DE CONTACTO CON LOS OJOS: Enjuagar cuidadosamente con agua durante varios minutos. Quitar las lentes de contacto, si lleva y resulta f cil. Seguir enjuagando. P302 + P352: EN CASO DE CONTACTO CON LA PIEL: Lavar con agua y jab n abundantes.

5 P280: Llevar guantes/prendas/gafas/m scara de protecci los reactivos guardando las precauciones habituales de trabajo en el laboratorio de an lisis cl los reactivos y las muestras deben descartarse de acuerdo a la normativa local E INSTRUCCIONES DEALMACENAMIENTOR eactivos Provistos: estables a temperatura ambiente hasta la fecha de vencimiento indicada en la de Trabajo: a temperatura ambiente y protegido de la luz es estable 15 d as a partir de la fecha de su pre-paraci u orinaa) Recolecci n: obtener suero de la manera usual.

6 En el caso de orina, obtener orina de 2 horas o de 24 horas empleando un recipiente perfectamente limpio y mantenien-do en el refrigerador (2-10oC) durante la recolecci n. Medir la diuresis, tomar una al cuota y efectuar una diluci n 1:50 de la misma. En caso que la diuresis sea de 2 horas, mul-tiplicar el volumen medido por 12 para calcular la cantidad de Creatinina eliminada durante 24 ) Aditivos: no se ) Sustancias interferentes conocidas: sueros con con-centraciones de bilirrubina mayores a 50 mg/l producen valores err se observan interferencias por hem lisis ligera o modera-da, hiperlipemia, disproteinemia ni crom genos no- Creatinina (tales como glucosa, cido asc rbico, ceto cidos, glutati n o ergotionina).

7 Referirse a la bibliograf a de Young para los efectos de las drogas en el presente m ) Estabilidad e instrucciones de almacenamiento: la Creatinina en suero es estable hasta 24 horas y en orina hasta 4 d as, en refrigerador sin agregado de todos para la determinaci n de Creatinina en suero y orinaCreatinina directa870420022 / 00 p. 2/12 TECNICA DE PUNTO FINALMATERIAL REQUERIDO (no provisto)- Espectrofot metro o fotocolor metro- Micropipetas y pipetas- Probeta- Tubos o cubetas espectrofotom tricas- Ba o de agua a 37oC- Reloj o timerCONDICIONES DE REACCION- Longitud de onda: 510 nm en espectrofot metro o en fotocolor metro con filtro verde (500-520 nm)- Temperatura de reacci n: 37oC- Volumen de muestra: 0,1 ml- Volumen de Reactivo: 1 ml- Volumen final de reacci n: 1,15 ml- Tiempo de reacci n.

8 15 minutosPROCEDIMIENTOEn tres tubos marcados B (Blanco), S (Standard) y D (Desconocido) colocar: B S DAgua destilada 0,1 ml - -Standard - 0,1 ml -Muestra - - 0,1 mlReactivo de Trabajo 1 ml 1 ml 1 mlMezclar. Incubar 10 minutos en ba o a 37oC. Dentro de los 15 minutos de retirado del ba o, leer el Standard (S) y el Desconocido (D1) en espectrofot metro a 510 nm o en fotocolor metro con filtro verde (500-520 nm) llevando a 0,000 con el Blanco. Luego agregar:Reactivo C 50 ul - 50 ulMezclar. Dejar los tubos 5 minutos a temperatura ambiente y volver a leer el Desconocido (D2), llevando a 0,000 con el valores de referencia y el M todo de Control de Calidad son comunes para ambas t cnicas.

9 Ver el punto correspondiente en T cnica Cin DE LA MEZCLA DE REACCION FINALEl color de la reacci n es estable durante 6 horas por lo que la lectura debe efectuarse en ese lapso. CALCULOS1) Creatinina en suero (mg/l) = (D1 - D2) x f 20 mg/l f = S D1 - D22) Creatinina en orina (g/24 hs) = x V Ssiendo:V = volumen de la diuresis expresado en litros/24 hsLa f rmula surge de: D1 - D2 Creatinina en orina (g/24 hs) = x 0,020 g/l x 50 x V Sdonde:0,020 g/l = concentraci n del Standard50 = factor de diluci n3) Depuraci n de Creatinina End gena ( ): Creatinina en orina (g/24 hs) ml/min = x 694 ml/min Creatinina en suero (mg/l)donde.

10 G/24 hs mg x ml ml694 ml/min = = = mg/l 1 mg x min minLIMITACIONES DEL PROCEDIMIENTOEs importante asegurarse de que el mezclado despu s de agregar cada reactivo sea correcto para evitar errores en los Sustancias interferentes conocidas en uso de plasma proporciona resultados falsamente dismi-nuidos en un 8 a 15%.PERFORMANCEa) Reproducibilidad: procesando simult neamente replica-dos de una misma muestra se obtienen los siguientes datos: Nivel 7,3 mg/l 0,18 mg/l 2,4 % 15 mg/l 0,26 mg/l 1,7 %b) Linealidad: la reacci n es lineal hasta 100 mg/l.