MANUAL DE LABORATORIO PARA EL MANEJO DE HONGOS …

1 MANUAL DE LABORATORIOPARA EL MANEJO DE HONGOS ENTOMOPAT GENOSVER NICACA EDO TERESAAMESLa Vision del CIPEl Centro Internacional de la Papa (CIP) contribuir a reducir la pobreza y el hambre, a mejorar la salud humana, desarrollar sistemas de sustento rurales y urbanos sostenibles y robustos, y mejorar el acceso a los beneficios de los conocimientos y las tecnolog as modernas. El CIP, un Centro Mundial, afrontar estos desaf os ejecutando y convocando investigaciones y alianzas que se centren en la papa, el camote, las ra ces y los tub rculos andinos, y los sistemas de monta a y otras zonas menos favorecidas en donde el CIP puede contribuir a un desarrollo humano saludable y CIP es un centro perteneciente a Future Harvest (Cosecha del Futuro), y recibe la mayor parte de su financiamiento de un grupo de gobiernos, fundaciones privadas y organizaciones internacionales y regionales que conforman el Grupo para la Investigaci n Agr cola Internacional, m s conocido por sus siglas en ingl s FUTUREHARESTMANUAL DE LABORATORIOPARA EL MANEJO DEHONGOS ENTOMOPAT GENOSVER NICA CA EDOTERESA AMESM anual de LABORATORIO para el MANEJO de HONGOS Entomopat genos.

2 Lima, Per ;Centro Internacional de la Papa (CIP), Lima, Per , 62 p. Centro Internacional de la Papa (CIP), 2004 Las publicaciones del CIP contribuyen con informaci n importante sobre el desarrollopara el dominio p blico. Los lectores est n autorizados a citar o reproducir estematerial en sus propias publicaciones. Se solicita respetar los derechos de autor delCIP y enviar una copia de la publicaci n donde se realiz la cita o public el material alDepartamento de Comunicaci n y Difusi n, a la direcci n que se indica Internacional de la PapaApartado 1558 Lima 12, Per n: Ca edo V., Ames T. a: Ver nica Ca edoDise o y Diagramaci n: Milton Hidalgo, Departamento de Comunicaci n y Difusi nCoordinaci n: Cecilia Lafosse, Departamento de Comunicaci n y Disfusi nISBN 92-9060-238-4 Tiraje: 1000 ejemplaresImpreso en el Per Octubre del 2004 CONTENIDOP resentaci n ..Introducci n ..Generalidades de los HONGOS entomopat genos.

3 Clasificaci n de los HONGOS entomopat genos .. Mecanismo de infecci n de los HONGOS entomopat genos ..Asepsia .. Desinfecci n del ambiente ( LABORATORIO y almacenamiento) ..Medios de cultivo de LABORATORIO .. Agar agua .. Papa dextrosa agar (PDA) .. Fitolevadura .. Sabouraud .. Miel peptona agar ..Colecci n y aislamiento de HONGOS entomopat genos ..Cultivos monosp ricos .. Aislamiento de punta de hifa ..iii1357101416181920212122242931 Caracterizaci n morfol gica .. Descripci n de la colonia .. Descripci n del hongo .. Caracter sticas morfol gicas m s importatntes de loshongos entomopat genos m s comunes ..Conteo de conidias en el hematoc metro o c mara de Neubauer ..Caracterizaci n fisiol gica .. N mero de conidias .. Viabilidad de conidias ..Conservaci n de HONGOS .. Conservaci n en s lica gel .. Conservaci n de HONGOS por liofilizaci n ..Multiplicaci n de HONGOS entomopat genos sobre diferentessustratos naturales.

4 Bioensayos ..Glosario ..Literatura consultada ..3333343540434343454647505255601 PRESENTACI NEn los primeros a os del Siglo XXI, las proyecciones sobre el incrementopoblacional indican que en las d cadas venideras habr necesidad deproducir m s y mejores alimentos para satisfacer la demanda mundial. Sinembargo, este reto es amenazado por las plagas, que representan un serioproblema para los agricultores, reduciendo su rentabilidad ycompetitividad. Por otro lado, actualmente existe evidencia de que un usoirracional de plaguicidas para controlar las plagas puede generar seriosproblemas relacionados con el medio ambiente o la salud de las esta raz n, instituciones como el Centro Internacional de la Papa (CIP),realizan trabajos de investigaci n para encontrar m todos alternativos parael control de plagas. Entre estos m todos innovadores se incluye el uso deenemigos naturales, como los HONGOS entomopat genos, una de cuyasventajas es reducir el riesgo de causar efectos negativos en el ambiente oen las personas.

5 Sin embargo, hay a n mucho trabajo por hacer para tenerbioplaguicidas eficientes basados en HONGOS , siendo el primer paso lacolecci n, aislamiento, caracterizaci n y multiplicaci n de estosmicroorganismos. Esta etapa de la investigaci n debe realizarsecorrectamente, para establecer bases s lidas para el futuro desarrollo debioplaguicidas, ya que se requiere conocer muy bien al agente2entomopat geno para poder multiplicarlo y evaluarlo como potencialcontrol biol gico. El MANUAL de LABORATORIO que se presenta en estedocumento representa el esfuerzo de los investigadores del CIP pararealizar un trabajo cient fico y t cnico sobre el uso de HONGOS . Eldocumento incluye temas sobre los medios de cultivo en LABORATORIO , lacolecci n y el aislamiento, el cultivo y caracterizaci n, la conservaci n, lamultiplicaci n y los principios para realizar bioensayos con estosmicroorganismos. El objetivo de este MANUAL es presentar diversasmetodolog as que puedan ser tiles para muchas instituciones,especialmente de investigaci n y educaci n, actualmente interesadas enlos HONGOS entomopat genos como m todos de control de Ortiz,L der de Divisi n de MANEJO Integrado de Cultivos, Centro Internacional dela Papa (CIP).

6 3 INTRODUCCI NLa mayor parte de los insectos que atacan a las plantas cultivadas tienenenemigos naturales que los parasitan y matan, produciendo as unareducci n considerable en su poblaci n. El uso de hongosentomopat genos para la exterminaci n de tales insectos constituye, porlo tanto, un componente importante de control, siendo muchos los hongosmencionados en diversos estudios que se usan para este prop el cultivo de la papa, tanto la planta como los tub rculos son infestadospor diversos insectos que destruyen la planta, durante su permanencia enel campo, y el tub rculo, una vez cosechado. A su vez, HONGOS comoBeauveria spp., Metarhizium anisopliae, Lecanicillium (Verticillium) lecanii yPaecilomyces spp., son comunes en el campo. Estos HONGOS tienen unamplio rango de hospedantes y han sido utilizados para controlar diversasplagas en diferentes lugares. En el Per se ha trabajado en programas parael control del gorgojo de los Andes principalmente.

7 Tambi n se hancontrolado nematodos utilizando Paecilomyces la importancia que determinados HONGOS tienen en nuestro mediopara el control de insectos que atacan al cultivo de papa, se ha preparado4el presente MANUAL , para que sirva de gu a en los trabajos de investigaci ny propagaci n de HONGOS con fines de indicaciones que se dan est n al alcance incluso de laboratorios nomuy bien equipados, pues los m todos descritos se pueden llevar a caboen condiciones austeras. Los lineamientos generales que se dan aqu parala preparaci n del sustrato para la propagaci n de los HONGOS , tanimportante para la inoculaci n en el campo y en el almac n, pueden sermodificados de acuerdo a las condiciones de cada lugar y a los insumos conque se DE LOS HONGOSENTOMOPAT GENOSUno de los factores que limita la producci n de los cultivos son las plagasagr colas. El uso indiscriminado de insecticidas org nicos sint ticos hatra do como consecuencia la selecci n de individuos resistentes, laresurgencia de nuevas plagas y la contaminaci n ambiental y del factores han hecho posible el surgimiento de sistemas nuevos deproducci n agr cola, como la producci n org nica; han creado la necesidadde obtener productos inofensivos para otros organismos no perjudiciales(entom fagos) y han obligado a legislar m s estrictamente sobre lapresencia de residuos en los productos MANEJO integrado de plagas (MIP), que se basa en principios totalmenteecol gicos, considera todo el agroecosistema en su conjunto.

8 Como tal,comprende la aplicaci n arm nica de diferentes m todos de control, comola lucha biol gica y las pr cticas culturales que requiere el cultivo, teniendoen cuenta los niveles poblacionales de las plagas y enfermedades acontrolar, la presencia de los biorreguladores naturales, las etapasfenol gicas del cultivo y las condiciones ambientales de los componentes del MIP es el control biol gico de las plagasagr colas mediante parasitoides, predadores (entom fagos) y organismosentomopat genos que pueden ser HONGOS , bacterias, virus, nematodos y6protozoarios. Los HONGOS entomopat genos son los que han recibido mayoratenci n por la gran variedad de especies y amplio rango de hospedantesas como por su crecimiento microsc pico sobre la superficie de suhu sped. Todos los insectos son susceptibles de ser afectados por alg HONGOS poseen caracter sticas muy especiales que les permitensobrevivir en forma paras tica sobre los insectos y en forma saprofita sobrematerial vegetal en descomposici n.

9 El crecimiento saprofito puede darcomo resultado la producci n de conidi foros, conidias y desarrollomiceliano. Esta caracter stica permite que el hongo pueda ser cultivado enel LABORATORIO utilizando t cnicas de producci n en masa de bajo HONGOS tienen un gran potencial para ser empleados comobiocontroladores. Entre los principales HONGOS que presentan estascaracter sticas est n: Beauveria, Metarhizium y principales ventajas de estos HONGOS grados variables de especificidad, pueden ser espec ficos anivel de familia o especies muy relacionadas. En el caso de las cepas,pueden ser espec ficas a nivel de especie, sin afectar a los el entomopat geno encuentra las condiciones adecuadas paraintroducirse y colonizar un ecosistema, se reproduce y renueva enforma continua, es decir, se vuelve persistente, haciendo innecesariasnuevas pueden aplicar mezclas de HONGOS entomopat genos con dosis subletales de insecticidas para lograr efectos sin rgicos superiores a loslogrados con aplicaciones de cada producto por contaminan el medio ambiente ni afectan al hombre u otrosanimales el hongo no llega a causar la muerte directamente, sepresentan efectos secundarios que alteran el normal desarrollo delciclo de vida del tambi n presentan algunas desventajas, a la variaci n de las condiciones clim ticas comotemperaturas extremas, desecaci n y luz ultravioleta.

10 Estas limitantesest n siendo contrarrestadas mediante el uso de aditivos (protectoressolares, aceites, antidesecantes). de condiciones de almacenamiento m s exigentes que lasmol culas inorg nicas, para evitar que pierdan su general, los insecticidas biol gicos no matan instant buenos niveles de control entre una y tres semanas despu sde la aplicaci n, dependiendo de la plaga y del ambiente. Sinembargo, el insecto deja de ser plaga al ser parasitado por el hongo,deja de alimentarse mucho antes de morir, disminuyendo el da n de los HONGOS entomopat genosDe acuerdo a la clasificaci n realizada por Ainsworth (1973), los HONGOS sonseparados en dos divisiones: Myxomycota, aquellos que forman plasmodios,y Eumycota, aquellos que no forman plasmodios y son frecuentementemicelianos. Los HONGOS entomopat genos se encuentran en la divisi nEumycota dentro de cinco subdivisiones: Mastigomycotina (formanzoosporas, oosporas y presentan estado perfecto), Zygomycotina (nopresentan zoosporas, presentan estado perfecto y forman zygosporas),Ascomycotina (presentan estado perfecto y forman ascosporas),Basidiomycotina (presentan estado perfecto forman basiodiosporas) yDeuteromycotina (no presentan estado perfecto ni zoosporas y formanconidias).