monoclonal - Wiener lab.

1 870060000 / 00 p. 1/8 Reactivos para la determinaci n de grupos sangu neos ABOAnti-A, Anti-B o Anti-AB monoclonalSIGNIFICACION CLINICAA comienzo del siglo pasado, Landsteiner descubri que los individuos pod an ser agrupados en A, B, AB u O de acuerdo a la presencia (grupos A, B, o AB) o ausencia (grupo O) de ant genos fuertemente inmunog nicos en la superficie de los gl bulos rojos. Tambi n demostr la existencia de anti-cuerpos (aglutininas) dirigidos contra los ant genos A y B y que el suero de un individuo no contiene anticuerpos para el ant geno presente en sus propios gl bulos rojos pero s contra los que no posee.

2 Actualmente se han identificado subgrupos de los grupos A y B. Todas estas observaciones revelaron la importancia de la compatibilidad ABO en la pr ctica transfusional. FUNDAMENTOS DEL METODOLa determinaci n de grupos sangu neos del sistema ABO se efect a enfrentando los gl bulos rojos del paciente con anticuerpos monoclonales Anti-A, Anti-B o Anti-AB. La aglutinaci n o no de los hemat es ensayados frente a cada uno de los reactivos indica la presencia o ausencia de los correspondientes ant genos. REACTIVOS PROVISTOSAnti-A, Anti-B o Anti-AB monoclonal : reactivos prepa-rados a partir de anticuerpos monoclonales de clase IgM secretados por l neas celulares de hibridoma de rat n en una soluci n tamponada conteniendo < 1 g/l de azida s dica como conservante.

3 Los clones involucrados y la coloraci n de cada producto se detallan en la siguiente tabla: Nombre del L nea(s) Celular(es) Color Producto Anti-A BIRMA-1 Azul Anti-B LB-2 Amarillo Anti-AB BIRMA-1/ES-4/ES-15 IncoloroEstos antisueros se caracterizan por su alta potencia, avidez y no ser de origen humano, no existen riesgos de infecci n por HIV, HBV o NO PROVISTOS De acuerdo a la t cnica empleada puede requerirse adi-cionalmente:- Soluci n fisiol gica- Soluci n fisiol gica tamponada con buffer fosfatos (PBS) pH 7,0 0,2- Soluci n fisiol gica de baja fuerza i nica (LISS)INSTRUCCIONES PARA SU USO Los reactivos se proveen listos para usar.

4 No deben E INSTRUCCIONES DEALMACENAMIENTOLos Reactivos Provistos son estables en refrigerador (2-10oC) hasta la fecha de vencimiento indicada en la caja. No congelar. Per odos prolongados de almacenamiento a temperaturas fuera de este rango pueden acelerar la p rdida de la actividad de los reactivos. Evitar los cambios t rmicos repetidos y limitar a lo estricta-mente necesario la exposici n de los reactivos a temperatura estas condiciones de uso y conservaci n, los reactivos, despu s de su apertura, son estables hasta la fecha de expiraci n indicada en la DE INESTABILIDAD O DETERIORO DE LOS REACTIVOS Desechar los reactivos cuando se observe contaminaci n de los mismos.

5 Si bien la azida de sodio se adiciona como bacteriost tico, se recomienda inspeccionar los reactivos visualmente antes de usarlo. No deben utilizarse si presen-tan turbidez. Los reactivos no deben utilizarse si presentan precipitados o part bulos rojos o sangre enteraa) Recolecci n: la sangre debe ser obtenida as pticamente, con o sin anticoagulante. Puede analizarse sangre obtenida por punci n digital para la t cnica en placa. Para evitar la coagulaci n de la sangre al utilizar esta t cnica, se la debe mezclar r pidamente con el reactivo a los ensayos con sangre de cord n, los gl bulos rojos deber n lavarse previamente con soluci n fisiol ) Aditivos: pueden emplearse como anticoagulantes: EDTA, heparina, ACD ( cido c trico, citrato, dextrosa), CPD (citrato, fosfato, dextrosa) o CPDA-1 (citrato, fosfato, dextrosa, adenina).

6 Puede utilizarse Anticoagulante W de Wiener ) Sustancias interferentes conocidas: las muestras que presentan hem lisis o contaminaci n microbiana, no deben ser ) Estabilidad e instrucciones de almacenamiento: 870060000 / 00 p. 2/8una vez obtenidas, las muestras deben ser analizadas lo antes posible. Si el an lisis no se realiza inmediatamente, conservar las mismas entre 2-10oC. Si se utiliz heparina o EDTA, la tipificaci n debe llevarse a cabo dentro de las 48 horas de extra das. Las muestras recogidas con ACD, CPD o CPDA-1 pueden ser ensayadas hasta los 35 d as a partir de su extracci n.

7 Si se emplean co gulos, deber efectuarse la tipificaci n dentro de los 7 d as de obtenida la sangre de donantes puede ser analizada hasta su fecha de REQUERIDO (no provisto)- Centr fuga- Tubos de hem lisis- Placas- Palillos mezcladores descartablesPRECAUCIONESLos reactivos son para uso diagn stico "in vitro" y est estrictamente reservado para uso profesional por personal calificado con comprobada competencia en inmunohema-tolog utilizar los reactivos fuera de la fecha de azida puede reaccionar con las ca er as de plomo o cobre generando compuestos explosivos.

8 Al eliminar el reactivo, se debe dejar correr grandes cantidades de los reactivos guardando las precauciones habituales de trabajo en el laboratorio de qu mica cl los reactivos y las muestras deben descartarse de acuerdo a la normativa local reactivos han sido estandarizados seg n los pro-cedimientos detallados a continuaci n; su desempe o en el uso mediante otras t cnicas no puede ser garantizado. La suspensi n de gl bulos rojos a ensayar debe ser preparada con soluci n fisiol gica, PBS o TECNICA EN PLACAP reparar una suspensi n de gl bulos rojos al 10%.

9 Como alternativa puede emplearse una suspensi n al 35-45% en plasma del mismo paciente o sangre ) Colocar en una placa limpia y rotulada, una gota de Reactivo Anti-A, Anti-B o Anti-AB monoclonal y agregar al lado 1 gota de suspensi n de gl bulos gotero provisto dispensa un volumen de 50 5 ul. Es importante que se mantenga la relaci n reactivo:c lulas en todos los sistemas de ) Mezclar el Reactivo y los gl bulos con un palillo des-cartable cubriendo un rea circular de 2 cm de di metro y balancear la placa continuamente durante 2 aglutinaci n visible macrosc picamente hasta los 2 minutos.

10 La observaci n puede facilitarse si se emplea una fuente de luz difusa. No debe emplearse prueba debe ser interpretada dentro de los 2 minutos para evitar que el reactivo se seque por evaporaci se observa aglutinaci n d bil debe repetirse la prueba utilizando la t cnica en tubo (por centrifuga-ci n). Pueden agregarse 2 vol menes de reactivo a 1 volumen de muestra para resaltar la aglutinaci n, sin riesgos de falsos TECNICA EN TUBO (por centrifugaci n)1) A una gota de Reactivo Anti-A, Anti-B o Anti-AB monoclonal colocada en un tubo de hem lisis rotula-do, agregar 1 gota de suspensi n de gl bulos rojos al 3-5%.