monoclonal - Wiener lab.

1 870060000 / 00 p. 1/8 Reactivos para la determinaci n de grupos sangu neos ABOAnti-A, Anti-B o Anti-AB monoclonalSIGNIFICACION CLINICAA comienzo del siglo pasado, Landsteiner descubri que los individuos pod an ser agrupados en A, B, AB u O de acuerdo a la presencia (grupos A, B, o AB) o ausencia (grupo O) de ant genos fuertemente inmunog nicos en la superficie de los gl bulos rojos. Tambi n demostr la existencia de anti-cuerpos (aglutininas) dirigidos contra los ant genos A y B y que el suero de un individuo no contiene anticuerpos para el ant geno presente en sus propios gl bulos rojos pero s contra los que no posee. Actualmente se han identificado subgrupos de los grupos A y B. Todas estas observaciones revelaron la importancia de la compatibilidad ABO en la pr ctica transfusional. FUNDAMENTOS DEL METODOLa determinaci n de grupos sangu neos del sistema ABO se efect a enfrentando los gl bulos rojos del paciente con anticuerpos monoclonales Anti-A, Anti-B o Anti-AB.

2 La aglutinaci n o no de los hemat es ensayados frente a cada uno de los reactivos indica la presencia o ausencia de los correspondientes ant genos. REACTIVOS PROVISTOSAnti-A, Anti-B o Anti-AB monoclonal : reactivos prepa-rados a partir de anticuerpos monoclonales de clase IgM secretados por l neas celulares de hibridoma de rat n en una soluci n tamponada conteniendo < 1 g/l de azida s dica como conservante. Los clones involucrados y la coloraci n de cada producto se detallan en la siguiente tabla: Nombre del L nea(s) Celular(es) Color Producto Anti-A BIRMA-1 Azul Anti-B LB-2 Amarillo Anti-AB BIRMA-1/ES-4/ES-15 IncoloroEstos antisueros se caracterizan por su alta potencia, avidez y no ser de origen humano, no existen riesgos de infecci n por HIV, HBV o NO PROVISTOS De acuerdo a la t cnica empleada puede requerirse adi-cionalmente:- Soluci n fisiol gica- Soluci n fisiol gica tamponada con buffer fosfatos (PBS) pH 7,0 0,2- Soluci n fisiol gica de baja fuerza i nica (LISS)INSTRUCCIONES PARA SU USO Los reactivos se proveen listos para usar.

3 No deben E INSTRUCCIONES DEALMACENAMIENTOLos Reactivos Provistos son estables en refrigerador (2-10oC) hasta la fecha de vencimiento indicada en la caja. No congelar. Per odos prolongados de almacenamiento a temperaturas fuera de este rango pueden acelerar la p rdida de la actividad de los reactivos. Evitar los cambios t rmicos repetidos y limitar a lo estricta-mente necesario la exposici n de los reactivos a temperatura estas condiciones de uso y conservaci n, los reactivos, despu s de su apertura, son estables hasta la fecha de expiraci n indicada en la DE INESTABILIDAD O DETERIORO DE LOS REACTIVOS Desechar los reactivos cuando se observe contaminaci n de los mismos. Si bien la azida de sodio se adiciona como bacteriost tico, se recomienda inspeccionar los reactivos visualmente antes de usarlo.

4 No deben utilizarse si presen-tan turbidez. Los reactivos no deben utilizarse si presentan precipitados o part bulos rojos o sangre enteraa) Recolecci n: la sangre debe ser obtenida as pticamente, con o sin anticoagulante. Puede analizarse sangre obtenida por punci n digital para la t cnica en placa. Para evitar la coagulaci n de la sangre al utilizar esta t cnica, se la debe mezclar r pidamente con el reactivo a los ensayos con sangre de cord n, los gl bulos rojos deber n lavarse previamente con soluci n fisiol ) Aditivos: pueden emplearse como anticoagulantes: EDTA, heparina, ACD ( cido c trico, citrato, dextrosa), CPD (citrato, fosfato, dextrosa) o CPDA-1 (citrato, fosfato, dextrosa, adenina). Puede utilizarse Anticoagulante W de Wiener ) Sustancias interferentes conocidas: las muestras que presentan hem lisis o contaminaci n microbiana, no deben ser ) Estabilidad e instrucciones de almacenamiento: 870060000 / 00 p.

5 2/8una vez obtenidas, las muestras deben ser analizadas lo antes posible. Si el an lisis no se realiza inmediatamente, conservar las mismas entre 2-10oC. Si se utiliz heparina o EDTA, la tipificaci n debe llevarse a cabo dentro de las 48 horas de extra das. Las muestras recogidas con ACD, CPD o CPDA-1 pueden ser ensayadas hasta los 35 d as a partir de su extracci n. Si se emplean co gulos, deber efectuarse la tipificaci n dentro de los 7 d as de obtenida la sangre de donantes puede ser analizada hasta su fecha de REQUERIDO (no provisto)- Centr fuga- Tubos de hem lisis- Placas- Palillos mezcladores descartablesPRECAUCIONESLos reactivos son para uso diagn stico "in vitro" y est estrictamente reservado para uso profesional por personal calificado con comprobada competencia en inmunohema-tolog utilizar los reactivos fuera de la fecha de azida puede reaccionar con las ca er as de plomo o cobre generando compuestos explosivos.

6 Al eliminar el reactivo, se debe dejar correr grandes cantidades de los reactivos guardando las precauciones habituales de trabajo en el laboratorio de qu mica cl los reactivos y las muestras deben descartarse de acuerdo a la normativa local reactivos han sido estandarizados seg n los pro-cedimientos detallados a continuaci n; su desempe o en el uso mediante otras t cnicas no puede ser garantizado. La suspensi n de gl bulos rojos a ensayar debe ser preparada con soluci n fisiol gica, PBS o TECNICA EN PLACAP reparar una suspensi n de gl bulos rojos al 10%. Como alternativa puede emplearse una suspensi n al 35-45% en plasma del mismo paciente o sangre ) Colocar en una placa limpia y rotulada, una gota de Reactivo Anti-A, Anti-B o Anti-AB monoclonal y agregar al lado 1 gota de suspensi n de gl bulos gotero provisto dispensa un volumen de 50 5 ul.

7 Es importante que se mantenga la relaci n reactivo:c lulas en todos los sistemas de ) Mezclar el Reactivo y los gl bulos con un palillo des-cartable cubriendo un rea circular de 2 cm de di metro y balancear la placa continuamente durante 2 aglutinaci n visible macrosc picamente hasta los 2 minutos. La observaci n puede facilitarse si se emplea una fuente de luz difusa. No debe emplearse prueba debe ser interpretada dentro de los 2 minutos para evitar que el reactivo se seque por evaporaci se observa aglutinaci n d bil debe repetirse la prueba utilizando la t cnica en tubo (por centrifuga-ci n). Pueden agregarse 2 vol menes de reactivo a 1 volumen de muestra para resaltar la aglutinaci n, sin riesgos de falsos TECNICA EN TUBO (por centrifugaci n)1) A una gota de Reactivo Anti-A, Anti-B o Anti-AB monoclonal colocada en un tubo de hem lisis rotula-do, agregar 1 gota de suspensi n de gl bulos rojos al 3-5%.

8 2) Mezclar y centrifugar 20 segundos a 1000 ) Agitar el tubo para despegar las c lulas y examinar macrosc picamente la presencia o ausencia de aglu-tinaci n. La observaci n puede facilitarse si se emplea una fuente de luz TECNICA EN TUBO (por sedimentaci n)1) A una gota de Reactivo Anti-A, Anti-B o Anti-AB monoclonal colocada en un tubo de hem lisis rotula-do, agregar 1 gota de suspensi n de gl bulos rojos al 3-5%.2) Mezclar e incubar durante 60 minutos a temperatura ) Agitar el tubo para resuspender las c lulas y examinar macrosc picamente la aglutinaci n. La observaci n puede facilitarse si se emplea una fuente de luz reacciones en tubo deben ser le das inmediata-mente e interpretar los resultados sin DE LOS RESULTADOST cnica en placaReacci n positiva: los hemat es aglutinan en segundos y permanecen aglutinados al balancear la placa.

9 Indica la presencia del ant geno eritrocitario n negativa: no se observa aglutinaci n a los 2 minutos, indicando ausencia del ant geno cnica en tuboLectura: golpear suavemente el tubo para desprender el sedimento y examinar macrosc picamente la presencia o ausencia de aglutinaci n negativa: no se observa aglutinaci n a los 2 mi-nutos, indicando ausencia del ant geno corespondiente. La resuspensi n de los gl bulos rojos es homog n positiva: los hemat es aglutinan en segundos y permanecen aglutinados una vez resuspendidos. Indica la presencia del ant geno eritrocitario casos dudosos se recomienda esperar 2 los resultados obtenidos en las pruebas de gl bulos rojos (directas), excepto las realizadas sobre muestras de sangre de infantes, deben ser confirmadas por una prueba sobre suero (inversa), usando eritrocitos tipificados A1, A2, B y O.

10 En la siguiente tabla se muestran los perfiles esperados:870060000 / 00 p. 3/8 Prueba directa Prueba inversa (Gl bulos rojos) (Suero) Grupo Anti-A Anti-B Anti-AB C l. A1 C l. A2 C l. B C l. O - - - + + + - O + - + - - + - A - + + + + - - B + + + - - - - ABCualquier discrepancia entre las pruebas directa e inversa debe ser investigada y resuelta antes de informar el grupo sangu DE CONTROL DE CALIDADEl control de calidad puede efectuarse ensayando gl bulos rojos tipificados. Debe realizarse un control de los reactivos al comienzo de cada jornada de trabajo con gl bulos rojos A1, A2, B y DEL PROCEDIMIENTOP ueden obtenerse resultados err neos debido a:- Contaminaci n de los materiales empleados en la Temperatura incorrecta de incubaci Reducci n del tiempo de incubaci n Neonatos: los ant genos A y B no se encuentran totalmente expresados en el reci n nacido.