UIBC/TIBC C AA - Wiener lab.

1 861273122 / 01 p. 1/9M todo colorim trico directo para la determinaci n de la capacidad latente de fijaci n de hierro (UIBC) en suero o plasmaUIBC/TIBC AALINEA LIQUIDASIGNIFICACION CLINICAEl hierro se transporta desde un rgano hacia otro formando un complejo con una prote na denominada transferrina. Dado que normalmente s lo un tercio de los sitios de uni n est n ocupados, la transferrina posee una considerable ca-pacidad de uni n al hierro. Esta se conoce como capacidad latente de fijaci n de hierro (UIBC).

2 La suma de hierro s rico y UIBC representa la capacidad total de fijaci n de hierro (TIBC).Si bien las mediciones de hierro s rico son importantes desde el punto de vista cl nico, cuando se combinan con valores de UIBC/TIBC permiten obtener un diagn stico m s completo de enfermedades como anemia y afecciones hep DEL METODOUna cantidad conocida de iones de hierro se adiciona a la muestra a pH alcalino para saturar la transferrina y el ex-ceso no unido se mide colorim tricamente. UIBC es igual a la diferencia entre la concentraci n de hierro adicionado y el exceso no unido.

3 TIBC se puede calcular como la suma de hierro s rico y la capacidad latente de fijaci n de hierro (UIBC).REACTIVOS PROVISTOSA. Reactivo A: buffer Tris 500 mM, pH 8,7 conteniendo 50 ug/dl de hierro (II), tiourea 80 Reactivo B: soluci n de ferrozina 5 Standard: soluci n de iones hierro (II) equivalente a 500 NO PROVISTOS- Agua Fer-color AA o Fer-color AA l quida, para el c lculo de PARA SU USOR eactivos Provistos: listos para usar. El Standard es utili-zado en algunas adaptaciones a analizadores autom reactivos son para uso diagn stico "in vitro".

4 Evitar la ingesti n y el contacto con los Reactivo A contiene tiourea; estudios experimentales realizados con esta droga en animales han evidenciado un posible efecto carcinog el material a utilizar debe estar libre de hierro por lo que debe sumergirse al menos 6 horas en soluci n de HCl 10% y luego enjuagar con abundante cantidad de agua libre de : Nocivo en caso de ingesti n. P262: Evitar el contacto con los ojos, la piel o la ropa. P305 + P351 + P338: EN CASO DE CONTACTO CON LOS OJOS: Enjuagar cuidadosamente con agua durante varios minutos.

5 Quitar las lentes de contac-to, si lleva y resulta f cil. Seguir enjuagando. P302 + P352: EN CASO DE CONTACTO CON LA PIEL: Lavar con agua y jab n abundantes. P280: Llevar guantes/prendas/gafas/m scara de protecci nUtilizar los reactivos guardando las precauciones habituales de trabajo en el laboratorio de an lisis cl los reactivos y las muestras deben descartarse de acuerdo a la normativa local E INSTRUCCIONES DE ALMACENAMIENTOR eactivos Provistos: son estables a 2-10oC hasta la fecha de vencimiento indicada en la DE INESTABILIDAD O DETERIORO DE LOS REACTIVOSV ariaciones en las lecturas de Blancos de Reactivos y/o Standard indican contaminaciones ocasionales (agua, ma-terial de vidrio, etc.)

6 MUESTRAS uero o plasma heparinizadoa) Recolecci n: el paciente debe estar en ayunas y las extracciones deben practicarse siempre a la misma hora (preferentemente de ma ana) ya que las fluctuaciones fisiol gicas son significativas durante el d ) Aditivos: en caso de utilizar plasma como muestra debe usarse heparina como ) Sustancias interferentes conocidas: no se observa interferencia por bilirrubina conjugada hasta 20 mg/dl, bilirru-bina no conjugada hasta 35 mg/dl y heparina hasta 50 UI/ml. Se recomienda el uso de muestras libres de hem lisis.

7 Los triglic ridos no interfieren hasta 1200 mg/dl en la t cnica autom tica y 300 mg/dl en la t cnica a la bibliograf a de Young para los efectos de las drogas en el presente m ) Estabilidad e instrucciones de almacenamiento: las mues-tras pueden conservarse una semana en refrigerador (2-10oC). En caso de no procesarse en el momento, congelar para su conservaci REQUERIDO (no provisto)- Espectrofot metro o analizador autom Micropipetas y pipetas para medir los vol menes Tubos o cubetas espectrofotom / 01 p.

8 2/9- Ba o a Agua libre de Cron DE REACCION- Longitud de onda: 560 nm - Temperatura de reacci n: 37oC- Tiempo de reacci n: 6 minutos- Volumen de muestra: 100 ul- Volumen total de reacci n: 1,3 mlPROCEDIMIENTOEn dos tubos o cubetas espectrofotom tricas marcados B (Blanco) y D (Desconocido) colocar: B DAgua bidestilada 100 ul -Muestra - 100 ulReactivo A 1 ml 1 mlMezclar, incubar 3 minutos a 37oC. Leer la absorbancia de B (BA) y de D (BD) en espectrofot metro a 560 nm llevando a cero el aparato con agua. Luego agregar:Reactivo B 200 ul 200 ulMezclar inmediatamente, incubar 3 minutos a 37oC.

9 Volver a leer cada uno en las condiciones especificadas DE LA MEZCLA DE REACCION FINALLos tubos deben ser le dos entre 3 y 30 minutos luego de completados los pasos del DE LOS RESULTADOSC orregir las lecturas de B y D, rest ndoles los Blancos correspondientes:B - BA = B corregidaD - BD = D corregida D corregidaUIBC (ug/dl) = 500 - (500 x ) B corregidaEjemplo:BA = 0,000 ; B = 0,170 ; B corregida = 0,170 = 0,020 ; D = 0,110 ; D corregida = 0,090 0,09 UIBC (ug/dl) = 500 - (500 x ) = 235 ug/dl 0,17C lculos adicionales:TIBC (ug/dl) = UIBC (ug/dl) + Hierro s rico (ug/dl) 100 x Hierro s rico% Saturaci n de Transferrina = TIBCMETODO DE CONTROL DE CALIDADP rocesar 2 niveles de un material de control de calidad (Stan-datrol S-E 2 niveles) con valores conocidos de UIBC/TIBC con cada determinaci TEORICOSI ntervalos en adultos:UIBC:Hombres: 140-330 ug/dlMujeres: 140-346 ug/dlTIBC: 250-425 ug/dl% Saturaci n de Transferrina:Hombres.

10 20-50%Mujeres: 15-50%Se recomienda que cada laboratorio establezca sus propios valores de DE UNIDADES AL SISTEMA SIUIBC (ug/dl) x 0,179 = UIBC (umol/l)TIBC (ug/dl) x 0,179 = TIBC (umol/l)LIMITACIONES DEL PROCEDIMIENTO- Ver Sustancias interferentes conocidas en Limpieza del material: todo el material de laboratorio em-pleado debe estar libre de hierro, para ello debe ser su-mergido durante al menos 6 horas en HCl 10%, eliminando la acidez mediante numerosos lavados con agua libre de hierro. Todo el material debe ser empleado exclusivamente para la determinaci n de ) Reproducibilidad: procesando de acuerdo al documento EP15-A del CLSI (ex-NCCLS), se obtuvo lo siguiente:Precisi n intraensayo (n = 20) Nivel 132,46 ug/dl 1,07 ug/dl 0,81 % 184,83 ug/dl 1,32 ug/dl 0,72 % 416,35 ug/dl 5,04 ug/dl 1,21 %Precisi n total (n = 20) Nivel 132,46 ug/dl 3,73 ug/dl 2,82 % 184,83 ug/dl 6,70 ug/dl 3,62 % 416,35 ug/dl 7,63 ug/dl 1,83 %b) L mite de detecci n.