Creatinina - Wiener lab.

1 M todo cin tico para la determinaci n de Creatinina en suero, plasma u orinaCreatinina cin tica AALINEA LIQUIDASIGNIFICACION CLINICALa Creatinina , compuesto sumamente difusible, se elimina del organismo casi exclusivamente por filtraci n renal. Su determinaci n en suero, as como la depuraci n de creati-nina end gena constituyen par metros importantes para el diagn stico de diversas afecciones DEL METODOLa Creatinina reacciona con el picrato alcalino (reacci n de Jaffe) produciendo un crom geno rojo. La velocidad de esta reacci n, bajo condiciones controladas, es una medida de la concentraci n de Creatinina de la muestra puesto que se comporta como una reacci n cin tica de primer orden para la Creatinina . Por otra parte, se ha demostrado que los crom genos no- Creatinina que interfieren en la mayor parte de las t cnicas convencionales, reaccionan dentro de los 30 segundos de iniciada la reacci n. De manera que entre los 30 segundos y los 5 minutos posteriores al inicio de la reacci n, el incremento de color se debe exclusivamente a la PROVISTOSA.

2 Reactivo A: soluci n de cido p crico 12,7 mmol/l y lau-rilsulfato de sodio 8,4 Reactivo B: soluci n de borato 53 mmol/l e hidr xido de sodio 970 Standard*: soluci n de Creatinina 20 NO PROVISTOSC alibrador A plus de Wiener PARA SU USOR eactivo A: listo para usar. A baja temperatura puede pre-sentar turbidez o sedimento. En tal caso, colocar en ba o de agua a 37oC unos minutos antes de B: listo para de Trabajo: de acuerdo al volumen de trabajo, mezclar cuatro partes de Reactivo A y una parte de Reacti-vo B. Rotular y fechar. A baja temperatura puede presentar turbidez o sedimento. En tal caso, colocar en ba o de agua a 37oC unos minutos antes de kit es para uso diagn stico "in vitro". Reactivo B: corrosivo. H315 + H320: Provoca irritaci n cut nea y ocular. H314: Provoca quemaduras graves en la piel y lesiones oculares graves. P262: Evitar el contacto con los ojos, la piel o la ropa. P305 + P351 + P338: EN CASO DE CONTACTO CON LOS OJOS: Enjuagar cuidadosamente con agua durante varios minutos.

3 Quitar las lentes de contacto, si lleva y resulta f cil. Seguir enjuagando. P302 + P352: EN CASO DE CONTACTO CON LA PIEL: Lavar con agua y jab n abundantes. P280: Llevar guantes/prendas/gafas/m scara de protecci los reactivos guardando las precauciones habituales de trabajo en el laboratorio de an lisis cl los reactivos y las muestras deben descartarse de acuerdo a la normativa local E INSTRUCCIONES DEALMACENAMIENTOR eactivos Provistos: son estables a temperatura ambiente (menor a 25oC) hasta la fecha de vencimiento indicada en la de Trabajo: premezclado y en envase pl stico, es estable una semana a temperatura ambiente. En analizadores autom ticos que emplean Reactivo de Trabajo nico (premezcla-do), referirse a las adaptaciones espec ficas de cada la exposici n prolongada al aire, manteniendo el frasco bien tapado cuando no sea , plasma u orinaa) Recolecci n: el suero o plasma se deben obtener de la manera emplearse tambi n orina de 2 horas o de 24 horas.

4 Su recolecci n debe efectuarse en un recipiente perfecta-mente limpio que se mantendr en el refrigerador (2-10oC) durante el tiempo de la recolecci n. Medir la diuresis, tomar una al cuota y efectuar una diluci n 1:50 de la misma en agua destilada. En caso de que la diuresis sea de 2 horas, multiplicar el volumen medido por 12 para calcular la cantidad de Creatinina eliminada durante 24 ) Aditivos: en caso de utilizar plasma, recogerlo nicamen-te con heparina o ) Sustancias interferentes conocidas: cuando la mues-tra es suero o plasma, no se observan interferencias por hemoglobina hasta 0,78 g/dl (7,8 g/l), triglic ridos hasta mg/dl (17 g/l) ni bilirrubina hasta 24 mg/dl (240 mg/l); cuando la muestra es orina, no se observan interferencias por prote nas hasta 500 mg/dl (5 g/l), cido asc rbico hasta 100 mg/dl (1 g/l) ni cetonas hasta 4 a la bibliograf a de Young para los efectos de las drogas en el presente m ) Estabilidad e instrucciones de almacenamiento: el suero o plasma debe ser separado de los gl bulos rojos antes de las dos horas de la extracci n.

5 Conservados en refrigerador (2-10oC) su estabilidad es de 3 d as.* No provisto en todas las presentaciones CLa orina puede mantenerse hasta 4 d as en refrigerador (2-10oC) sin agregado de REQUERIDO (no provisto)- Espectrofot metro capaz de leer a 500 10 Micropipetas y pipetas para medir los vol menes Cubetas espectrofotom Ba o de agua a Cron DE REACCION- Longitud de onda: 500 nm- Temperatura de reacci n: 25oCEl control de la temperatura no es cr tico, pudiendo oscilar entre 22 y 28oC. Ver Limitaciones del Volumen de muestra: 0,2 ml- Volumen de Reactivo de Trabajo: 1,2 ml- Volumen final de reacci n: 1,4 mlPROCEDIMIENTO I- TECNICA PARA SUERO O PLASMAE quilibrar el Reactivo de Trabajo a la temperatura de reac-ci n (25oC). Antes de agregar la muestra, llevar el aparato a cero con agua destilada. En dos cubetas espectrofotom -tricas marcadas S (Standard) y D (Desconocido), colocar: S DReactivo de Trabajo 1,2 ml 1,2 mlStandard 0,2 ml -Muestra - 0,2 mlMezclar inmediatamente, iniciando al mismo tiempo el cron metro y proseguir la incubaci n.

6 A los 30 segundos exactos medir la absorbancia (S1 y D1) y continuar la incubaci n. Medir nuevamente la absorbancia (S2 y D2) a los 5 minutos (4 minutos 30 segundos despu s de la primera lectura).II- TECNICA PARA ORINAR ecolectar y preparar la muestra como se describi en Recolecci n , efectuando una diluci n 1:50 de la misma en agua desionizada. Aplicar luego la t cnica DE LOS RESULTADOS1) Creatinina en suero (mg/l) = (D2 - D1) x f 20 mg/lf = S2 - S1 D2 - D12) Creatinina en orina (g/24 hs) = x V S2 - S1siendo:V = volumen de la diuresis expresado en litros/24 hsLa f rmula surge de: D2 - D1 Creatinina en orina (g/24 hs) = x 0,020 g/l x 50 x V S2 - S1donde:0,020 g/l = concentraci n del Standard50 = factor de diluci nPara expresar la Creatinina en orina en mg/Kg/24 hs : Creatinina en orina (g/24 hs) x 1000 mg/gPeso del paciente (Kg)3) Depuraci n de Creatinina End gena ( ): Creatinina en orina (g/24 hs) ml/min = x 694 ml/min Creatinina en suero (mg/l)donde.

7 G/24 hs mg x ml ml694 ml/min = = = mg/l 1 mg x min minPara expresar en ml/min/1,73 m2 (ml/min) x 1,73 Superficie corporal del paciente (m2)METODO DE CONTROL DE CALIDADP rocesar 2 niveles de un material de control de calidad (Standatrol S-E 2 niveles) con concentraciones conocidas de Creatinina , con cada determinaci DE REFERENCIAS uero o plasma:Hombre: 7 - 13 mg/lMujer: 6 - 11 mg/lOrina:Hombre: 14 - 26 mg/Kg/24 hsMujer: 11 - 20 mg/Kg/24 :Hombre: 94 - 140 ml/min/1,73 m2 Mujer: 72 - 110 ml/min/1,73 m2Se recomienda que cada laboratorio establezca sus propios valores de DE UNIDADES AL SISTEMA SICreatinina (mg/l) x 8,84 = Creatinina (umol/l)LIMITACIONES DEL PROCEDIMIENTOVer Sustancias interferentes conocidas en causas de resultados err neos son:- Temperatura: si bien la temperatura de reacci n admite una variaci n entre 22 y 28oC, una diferencia entre la temperatura de incubaci n del Standard respecto de las muestras disminuye la precisi n del m Tiempo de lectura: ligeras variaciones en la medici n del tiempo afectan notablemente la exactitud del m todo.

8 Las lecturas deber n realizarse exactamente a los 30 segundos luego de haber mezclado la muestra con el reactivo y a los 5 minutos (4 minutos 30 segundos luego de la primera lectura).PERFORMANCEa) Reproducibilidad: procesando de acuerdo al documento EP15-A del CLSI (ex-NCCLS), se obtuvo lo siguiente:Precisi n intraensayo (n = 20) ,1 mg/l 0,27 mg/l3,8 %Suero14,7 mg/l 0,32 mg/l2,2 %54,9 mg/l 1,09 mg/l2,0 %440 mg/l 9,35 mg/l2,1 % mg/l 62,4 mg/l2,4 % mg/l 136 mg/l2,7 %Precisi n total (n = 20) ,1 mg/l 0,30 mg/l4,3 %Suero14,7 mg/l 0,48 mg/l3,3 %54,9 mg/l 1,47 mg/l2,7 %440 mg/l 20,5 mg/l4,6 % mg/l 119 mg/l4,5 % mg/l 177 mg/l3,5 %b) Linealidad: la reacci n es lineal hasta 90 mg/l de crea-tinina. Para valores superiores, diluir la muestra 1:2 1:4 con soluci n salina y repetir la determinaci n. Corregir los c lculos multiplicando por el factor de diluci n ) L mite de detecci n: el m ni mo cam bio de concentraci n de tec ta ble es 4,5 PARA ANALIZADORES AUTOMATICOSPara las instrucciones de programaci n debe consultarse el Manual del Usuario del Analizador en uso.

9 Para la calibra-ci n, debe usarse Calibrador A plus de Wiener 250 ml (2 x 100 ml Reactivo A + 2 x 25 ml Reactivo B)(C d. 1260360)- 200 ml (4 x 40 ml Reactivo A + 2 x 20 ml Reactivo B)(C d. 1009329)- 200 ml (4 x 40 ml Reactivo A + 2 x 20 ml Reactivo B)(C d. 1009254)- 300 ml (4 x 60 ml Reactivo A + 3 x 20 ml Reactivo B)(C d. 1009611)- 100 ml (4 x 20 ml Reactivo A + 2 x 10 ml Reactivo B)(C d. 1009810)BIBLIOGRAFIA- Owen, ; et al. - Biochem. J. 58:426 (1954).- Henry, et al. - Clinical Chemistry, Principles and Tech-nics, 2nd ed., Harper and Row Publishers Inc., (1974).- Butler, - J. Chem. Soc. (Perkin Trans. II), 853 (1975).- Labb , D et al. - Ann. Biol. Clin. 54:285 (1996).- Burtis, CA; Ashwood, ER - Tietz Fundamentals of Clin. Chem., 5th ed., Young, - "Effects of Drugs on Clinical Laboratory Tests", AACC Press, 5th ed., CLSI: Clinical and Laboratory Standards Institute (ex-NCCLS) - Protocol EP15-A, 2001 / EP 17A, Rosario - ArgentinaM Wiener Laboratorios 29442000 - Rosario - T c.

10 : Viviana E. C tolaBioqu micaProducto Autorizado PM-1102-14UR170131 Wiener siguientes s mbolos se utilizan en todos los kits de reactivos para diagn stico de Wiener lab. CEste producto cumple con los requerimientos previstos por la Directiva Europea 98/79 CE de productos sanitarios para el diagn stico "in vitro"PRepresentante autorizado en la Comunidad EuropeaVUso diagn stico "in vitro"XContenido suficiente para <n> ensayosHFecha de caducidadlL mite de temperatura (conservar a)No congelarFRiesgo biol gicoVolumen despu s de la reconstituci nContenidogN mero de loteMElaborado por:NocivoCorrosivo / C usticoIrritanteiConsultar instrucciones de usoCalibradorControlbbControl PositivocControl NegativohN mero de cat logo Calibr. Cont.