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1 864107100 / 02 p. 1/6 Para la determinaci n de lactato deshidrogenasa en suero, plasma y l quido cefalorraqu deoLDH-L SIGNIFICACION CLINICALa determinaci n de la actividad lactato deshidrogenasa (LDH) tiene una gran variedad de aplicaciones cl nicas. Por ser una enzima intracelular, su elevaci n es ndice de da o tisular con la consecuente liberaci n de sta a la circula-ci n. El da o puede variar desde una simple anoxia con ligero da o celular y p rdida de citoplasma hasta necrosis celular severa generando diversos grados de elevaci n de la actividad enzim tica. En el infarto agudo de miocardio, la actividad de LDH total (junto con las CK y AST), constituye un elemento importante de diagn stico. La misma comienza a elevarse 12-24 horas despu s de producido el infarto; alcanza un pico entre las 48-72 horas y permanece elevada hasta el s ptimo o d cimo d a.

2 Tambi n se registra un aumento de actividad de LDH total en pacientes con necrosis hep tica (producida por agentes t xicos o por infecci n aguda como la hepatitis viral) e incluso acompa ando a necrosis tubular renal, pielonefritis, etc. En los tumores sangu neos como leucemias y linfomas tambi n se observan valores aumentados de la el l quido cefalorraqu deo (LCR) el valor normal es de aproximadamente el 10% de su valor en suero, aumentando marcadamente su valor en meningitis bacterianas. En las meningitis virales la LDH aumenta su valor solo en el 10% de los DEL METODOEl m todo se basa en el siguiente esquema de reac-ci n: LDHL-lactato + NAD+ piruvato + NADH + H+La velocidad de formaci n de NADH es directamente pro-porcional a la actividad catal tica de la LDH y se determina midiendo el aumento de la absorbancia a 340 concentraciones del ensayo est n optimizadas de acuerdo a los procedimientos de referencia para la me-dici n de la actividad catal tica de las enzimas a 37oC descriptos por la Federaci n Internacional de Qu mica Cl nica (IFCC)REACTIVOS PROVISTOSA.

3 Reactivo A: soluci n de metilglucamina (MEG) 400 mM y lactato 61 mM; pH 9,4 a 37oC. B. Reactivo B: soluci n conteniendo NAD 61 mM. REACTIVOS NO PROVISTOS- Calibrador A plus de Wiener Soluci n fisiol gica (NaCl 9 g/l).INSTRUCCIONES PARA SU USOR eactivos Provistos: listos para reactivos son para uso diagn stico "in vitro".Utilizar los reactivos guardando las precauciones habituales de trabajo en el laboratorio de qu mica cl los reactivos y las muestras deben descartarse de acuerdo a la normativa local vigente. ESTABILIDAD E INSTRUCCIONES DEALMACENAMIENTOR eactivos Provistos: estables en refrigerador (2-10oC) hasta la fecha de vencimiento indicada en la caja. Una vez abiertos, no deben permanecer destapados ni fuera del refri-gerador por per odos prolongados. Evitar contaminaciones. Proteger de la luz , plasma o LCRa) Recolecci n: obtener el suero de la manera habitual, libre de hem lisis.

4 Tambi n pueden usarse plasma o LCR. El plas-ma debe estar libre de hem lisis y de c lulas ya que las pla-quetas poseen elevadas concentraciones de LDH. El plasma recogido en tubos primarios de acuerdo a las instrucciones del fabricante puede contener c lulas en suspensi n, generando resultados falsamente aumentados. Se recomienda transferir el plasma a un tubo secundario y ) Aditivos: en caso de que la muestra a emplear sea plas-ma, se recomienda el uso de heparina como anticoagulante. Tambi n puede utilizarse EDTA o citrato. En caso de utilizar EDTA, se ha demostrado que puede disminuir la actividad de la LDH hasta un 10%.c) Sustancias interferentes conocidas: no se observan interferencias por triglic ridos hasta 1400 mg/dl, bilirrubina hasta 30 mg/dl. La hemoglobina interfiere significativamente en todo su rango de concentraciones por lo que se recomien-da usar muestras libres de hem a la bibliograf a de Young para los efectos de las drogas en el presente m ) Estabilidad e instrucciones de almacenamiento: separar el suero o el plasma del co gulo o de las c lulas y efectuar el test inmediatamente.

5 En caso de no procesarse en el momento, puede conservarse 7 d as a 20-25oC, 4 d as a 2-10oC o 6 semanas a REQUERIDO (no provisto)- Micropipetas para medir los vol menes indicados- Analizador autom ticoC864107100 / 02 p. 2/6 PROCEDIMIENTO(Analizador autom tico)A continuaci n se detalla un procedimiento general para LDH-L en un analizador autom tico. Cuando se imple-mente la t cnica en un analizador en particular, siga las instrucciones de trabajo del mismo. En una cubeta mantenida a la temperatura elegida, colocar:Muestra o Calibrador 4 ulReactivo A 100 ulIncubaci n durante 300 segundos a 37oCReactivo B 20 ulIncubaci n durante 120 segundos a 37oC.[LDH] = ( A/min) x factor; NAD/NADH = 6230 M-1 cm-1 Los analizadores Wiener lab. calculan autom ticamente la actividad de LDH de cada m todo LDH-L fue estandarizado frente a la f rmula original del IFCC usada como Calibrador A plus es procesado de la misma manera que las muestras y a partir de l se calcula el factor recomienda usar calibraci n a dos puntos despu s de cambiar lote de reactivo y cuando el control de calidad lo DE CONTROL DE CALIDADP rocesar 2 niveles de un material de control de calidad (Standatrol S-E 2 niveles) con actividades conocidas de lactato deshidrogenasa, con cada determinaci DE REFERENCIAA dultos 135 -240 U/lNi os (2 - 15 a os) 120 -300 U/lReci n nacidos (4 a 20 d as)

6 240 - 600 U/lSe recomienda que cada laboratorio establezca sus propios valores de referencia, teniendo en cuenta sexo, edad, h bitos alimenticios, medicaci n y otros factores de su poblaci DE UNIDADES AL SISTEMA SILDH (U/l) x 0,0167 = LDH (ukat/l)LIMITACIONES DEL PROCEDIMIENTOVer Sustancias interferentes conocidas en muestras de plasma deben ser centrifugadas previa-mente a realizar el preservar la integridad de los reactivos deben evitarse todo tipo de contaminaciones, empleando para la medici n nicamente micropipetas perfectamente limpias y recomienda utilizar Standatrol S-E 2 niveles de Wiener lab, como material de control de calidad, ya que con controles de otras marcas comerciales pueden obtenerse valores dife-rentes al rango especificado, dado que los mismos dependen del m todo o sistema ) Reproducibilidad: procesando simult neamente repli-cados de una misma muestra, se obtienen los siguientes valores: Nivel 150 U/l 2,69 U/l 1,8 % 250 U/l 3,75 U/l 1,5 %b) Linealidad: la reacci n es lineal hasta 1000 U/l.

7 Para valores superiores, diluir la muestra 1+4 partes con soluci n fisiol gica (NaCl 9 g/l), repetir la determinaci n y multiplicar el resultado por el factor de diluci ) L mite de detecci n: 4 ) L mite de cuantificaci n: 20 PARA ANALIZADORES AUTOMATICOSPara las instrucciones de programaci n consultar las adap-taciones correspondientes a los analizadores de la l nea Wiener lab para el m todo LDH-L . Para la calibraci n debe utilizarse Calibrador A plus de Wiener ml: - 1 x 100 ml Reactivo A - 1 x 20 ml Reactivo B(C d. 1999726)120 ml: - 2 x 50 ml Reactivo A - 2 x 10 ml Reactivo B(C d. 1009213)150 ml: - 2 x 60 ml Reactivo A - 2 x 15 ml Reactivo B(C d. 1009364)150 ml: - 2 x 60 ml Reactivo A - 2 x 15 ml Reactivo B(C d. 1009625)BIBLIOGRAFIA- Conmutable Calibrador with Value Assigned by the IFCC Reference Procedure.

8 Clinical Chemistry 54/8:1349-1355, IFCC Primary Reference Procedures for the Measurement of Catalytic Activity Concentrations of Enzymes at 37oC. Clin. Chem. Lab. Med. 40/6:643-648, Young, - "Effects of Drugs on Clinical Laboratory Tests", AACC Press, 4th ed., Evaluation of the Linearity of Quantitative Measurement Procedures: A Statistical Approach; Approved Guideline. CLSI EP6-A Vol. 23 N 16, Method Comparison and Bias estimation Using Patient Samples; Approved Guideline - Second Edition. CLSI EP9-A2 Vol. 22 N 19, Protocols for Determination of Limits of Detection and Limits of Quantitation; Approved Guideline. CLSI EP17-A Vol. 24 N 34, J. V zquez, M. Adducci, D. Monz n, K. Iserson - Journal of Emergency Medicine, 37/1:93-97, / 02 p. 3/62000 Rosario - ArgentinaWiener lab.

9 M Wiener Laboratorios 29442000 - Rosario - T c.: Viviana E. C tolaBioqu micaProducto Autorizado mbolosLos siguientes s mbolos se utilizan en todos los kits de reactivos para diagn stico de Wiener lab. CEste producto cumple con los requerimientos previstos por la Directiva Europea 98/79 CE de productos sanitarios para el diagn stico "in vitro"VUso diagn stico "in vitro"XContenido suficiente para <n> ensayosHFecha de caducidadlL mite de temperatura (conservar a)No congelarFRiesgo biol gicoVolumen despu s de la reconstituci nContenidogN mero de lotehN mero de cat logoCalibradorbControlbControl PositivocControl NegativoiConsultar instrucciones de usoMElaborado por:XnNocivoCorrosivo / Ca sticoIrritanteXiPRepresentante autorizado en la Comunidad Europea