Proti 2 - Wiener lab.

1 870830122 / 00 p. 1/12 SIGNIFICACION CLINICALas prote nas son compuestos org nicos macromoleculares, ampliamente distribuidos en el organismo y esenciales para la vida. Act an como elementos estructurales y de transporte y aparecen bajo la forma de enzimas, hormonas, anticuerpos, factores de coagulaci n, prote na m s abundante en plasma es la alb mina. Una de sus funciones m s importantes es la de permitir el transporte de cidos grasos, hormonas esteroides, bilirrubina, cateco-laminas, que en forma libre son insolubles en medio concentraci n de alb mina en plasma influye notable-mente en el mantenimiento de la presi n coloidosm tica, lo que estar a relacionado con su relativamente bajo peso molecular y su gran carga condiciones patol gicas como p rdidas renales, desnu-trici n, infecciones prolongadas, etc.

2 , suelen presentarse hipoproteinemias, mientras que en otras como mieloma m ltiple, endocarditis bacteriana y hemoconcentraciones de diversos or genes, se observan general, ambas situaciones se ven acompa adas tam-bi n por hipoalbuminemias. Los aumentos anormales de alb mina son ocasionales y se relacionan casi siempre con deshidrataci n que produce el consecuente aumento en el contenido proteico del DEL METODOD eterminaci n de Prote nas Totales:Los enlaces pept dicos de las prote nas reaccionan con el i n c prico, en medio alcalino, para dar un complejo color violeta con m ximo de absorci n a 540 nm, cuya intensidad es pro-porcional a la concentraci n de prote nas totales en la n de Alb mina:La alb mina reacciona espec ficamente -sin separaci n pre-via- con la forma ani nica de la 3,3',5,5'-tetrabromo cresolsul-fon ftale na (BCF), en presencia de un exceso de colorante, en medio tamponado a pH 3,8.

3 El aumento de absorbancia a 625 nm respecto del Blanco de reactivo, es proporcional a la cantidad de alb mina presente en la PROVISTOSA. Reactivo A: complejo EDTA/Cu 13 mmol/l en hidr xido de sodio 875 mmol/l y alquil aril poli ter (AAP).B. Reactivo B: soluci n de 3,3',5,5'-tetrabromo cresolsulfon ftale na (en polioxietil n lauril ter).S. Standard (Suero Patr n): soluci n de alb mina y glo-bulinas de origen bovino, con t tulo conocido de prote nas y alb mina. Consultar los valores asignados en el r tulo, debido a que los mismos son lote espec PARA SU USOR eactivos Provistos: listos para reactivos son para uso diagn stico "in vitro".Utilizar los reactivos guardando las precauciones habituales de trabajo en el laboratorio de an lisis cl los reactivos y las muestras deben descartarse de acuerdo a la normativa local A: corrosivo.

4 H315 + H320: Provoca irritaci n cut nea y ocular. P262: Evitar el contacto con los ojos, la piel o la ropa. P305 + P351 + P338: EN CASO DE CONTACTO CON LOS OJOS: Enjuagar cuidadosamente con agua durante varios minutos. Quitar las lentes de contacto, si lleva y resulta f cil. Seguir enjuagando. P302 + P352: EN CASO DE CON-TACTO CON LA PIEL: Lavar con agua y jab n abundantes. P280: Llevar guantes/prendas/gafas/m scara de protecci E INSTRUCCIONES DE ALMACENAMIENTOR eactivos Provistos: son estables a temperatura ambiente (< 25 C) hasta la fecha de vencimiento indicada en la : es estable a temperatura ambiente (no mayor de 25oC) hasta la fecha de vencimiento indicada en la caja. Una vez abierto, debe conservarse en DE INESTABILIDAD O DETERIORO DE LOS REACTIVOSV ariaciones en el pH de los reactivos pueden ocasionar su deterioro.

5 Por este motivo se recomienda no intercambiar las tapas de los variaci n en los caracteres organol pticos del Standard puede ser indicio de deterioro del ) Recolecci n: debe obtenerse suero libre de hem ) Aditivos: no se ) Sustancias interferentes conocidas:- En la determinaci n de Prote nas Totales no se observa in-terferencia por bilirrubina hasta 100 mg/l, ni hem lisis ligera y en ning n caso se presenta turbiedad por En la determinaci n de Alb mina, no se observan interferen-cias por hem lisis moderada, bilirrubina hasta 200 mg/l ni lipe-mia hasta 20 g/l. Debido a que no interfieren las globulinas, en esta determinaci n no se requiere desproteinizaci n a la bibliograf a de Young para los efectos de las drogas en el presente m todo colorim trico para la determinaci n de Prote nas Totales y Alb mina en sueroProti 2 870830122 / 00 p.

6 2/12d) Estabilidad e instrucciones de almacenamiento: si no se procesa inmediatamente el suero puede conservarse hasta 3 d as en refrigerador (2-10oC) o una semana en REQUERIDO (no provisto)- Espectrofot metro o fotocolor Micropipetas y pipetas para medir los vol menes Tubos o cubetas espectrofotom Ba o de agua a 37oC (para Prote nas Totales).- Reloj o timer. DETERMINACION DE PROTEINAS TOTALESCONDICIONES DE REACCION- Longitud de onda: 540 nm en espectrofot metro o en fotocolor metro con filtro verde (520-560 nm).- Temperatura de reacci n: 37oC- Tiempo de reacci n: 15 minutos- Volumen de muestra: 50 ul- Volumen de Reactivo A: 3,5 ml- Volumen final de reacci n: 3,55 mlPROCEDIMIENTOEn tres tubos marcados B (Blanco), S (Standard) y D (Desconocido), colocar: B S DAgua destilada 50 ul - -Standard - 50 ul -Muestra - - 50 ulReactivo A 3,5 ml 3,5 ml 3,5 mlMezclar con varilla.

7 Incubar 15 minutos a 37oC. Leer en es-pectrofot metro a 540 nm o en fotocolor metro con filtro verde (520-560 nm) llevando a cero con el Blanco de DE LA MEZCLA DE REACCION FINALEl color de la reacci n es estable durante 12 horas por lo que la absorbancia debe ser le da dentro de ese lapso. DETERMINACION DE ALBUMINACONDICIONES DE REACCION- Longitud de onda: 625 nm en espectrofot metro o en fotocolor metro con filtro rojo (620-650 nm).- Temperatura de reacci n: 15-28oC- Tiempo de reacci n: 10 minutos- Volumen de muestra: 10 ul- Volumen de Reactivo B: 3,5 ml- Volumen final de reacci n: 3,51 mlPROCEDIMIENTOEn tres tubos marcados B (Blanco), S (Standard) y D (Desconocido), colocar: B S DStandard - 10 ul -Muestra - - 10 ulReactivo B 3,5 ml 3,5 ml 3,5 mlMezclar con varilla.

8 Mantener los tubos entre 15 y 28oC durante 10 minutos. Leer en espectrofot metro a 625 nm o en fotocolor metro con filtro rojo (620-650 nm) llevando a cero con el Blanco de DE LA MEZCLA DE REACCION FINALEl color es estable 20 minutos por lo que la absorbancia debe ser le da dentro de ese DE LOS RESULTADOSE mpleando el Standard tal como se indica en PROCEDI-MIENTO, los c lculos se realizan como sigue: (g/dl)Prote nas Totales (g/dl) = D x f f = S Alb. (g/dl)Alb mina (g/dl) = D x f f = S Alb mina (g/dl)Relaci n A/G = (g/dl) - Alb. (g/dl)Curva de calibraci nPara constatar que el color metro tenga una respuesta lineal en las longitudes de onda fijadas para las reacciones, puede prepararse una curva de calibraci n con cantidades cre-cientes de Standard (ej.)

9 : 50 y 100 ul para Prote nas Totales; 10 y 20 ul para Alb mina) con un volumen de reactivo de 3,5 ml en todos los casos. Si los valores obtenidos para el segundo tubo se apartan m s de un 5 % de los calculados de acuerdo a la lectura del primero debe emplearse para los c lculos la curva de calibraci DE CONTROL DE CALIDADP rocesar 2 niveles de un material de control de calidad (Standatrol S-E 2 niveles) con concentraciones conocidas de prote nas totales y alb mina, con cada determinaci n. VALORES DE REFERENCIASe determin el contenido de prote nas totales y alb mina en suero de personas sanas, de ambos sexos, con alimentaci n mixta normal y edades entre 17 y 40 a os; obteni ndose los siguientes rangos:Prote nas totales: 6,1 a 7,9 g/dlAlb mina: 3,5 a 4,8 g/dlRelaci n A/G: 1,2 a 2,2Se recomienda que cada laboratorio establezca sus propios valores de / 00 p.

10 3/12 CONVERSION DE UNIDADES AL SISTEMA SIProte nas totales (g/dl) x 10 = Prote nas totales (g/l)Alb mina (g/dl) x 10 = Alb mina (g/l)LIMITACIONES DEL PROCEDIMIENTOVer Sustancias interferentes conocidas en Determinaci n de Prote nas Totales:Puede usarse plasma como muestra, pero el resultado de la proteinemia estar incrementado en 0,2 g/dl debido a la presencia de fibrin geno, que no est considerado dentro de la definici n de Prote nas Determinaci n de Alb mina:Mientras se realice la reacci n entre 15 y 28oC puede utilizarse factor para los c lculos. Fuera de este rango, cambia la cin tica de la reacci n y no se completa el desarrollo del sistema debe estandarizarse con el Standard provisto, ya que los standards liofilizados y pools de sueros responden de distinta caso de utilizar un analizador autom tico se recomien-da, para una mejor performance, el empleo de Alb mina AA de Wiener ) Reproducibilidad: procesando replicados de las mismas muestras en distintos d as se obtuvieron los siguientes resultados:Prote nas ,6 g/dl 0,023 g/dl0,49 %5,8 g/dl 0,023 g/dl0,40 %7,0 g/dl 0,029 g/dl0,41 %Alb ,6 g/dl 0,079 g/dl3,0 %3,7 g/dl 0,071 g/dl1,9 %5,5 g/dl 0,070 g/dl1,3 %b) Recuperaci n.