Proti C - Wiener lab.

1 M todo colorim trico cuantitativo para la determinaci n de prote nas en orina y l quido cefalorraqu deoSIGNIFICACION CLINICAP rote nas en orinaUna cantidad de prote nas plasm ticas de peque o peso molecular son filtradas normalmente en forma libre a trav s del glom rulo renal y luego son, en parte, reabsorbidas por los t bulos condiciones fisiol gicas o benignas donde se puede observar un aumento en la excreci n urinaria de prote nas como en el ejercicio violento, fiebre, hipotermia, medici n de las prote nas urinarias es importante en la detecci n de patolog a renal. La proteinuria en la enfermedad renal puede resultar de una disfunci n glomerular o tubular.

2 En el primer caso se da por un aumento en el pasaje a trav s de los capilares del glom rulo y caracterizada por la p rdida de prote nas plasm ticas de igual o mayor tama o. En el segundo caso se da por una disminuci n en la capacidad de reabsorci n de prote nas por los t las patolog as en las que se produce un aumento en la excreci n de prote nas urinarias se encuentran: s ndrome nefr tico, s ndrome nefr tico, hipergammaglobulinemia mo-noclonal, nefropat a diab tica, infecciones del tracto nas en l quido cefalorraqu deo (LCR)La determinaci n de prote nas en LCR es til para evaluar la permeabilidad de la barrera hematoencef lica en muchas enfermedades inflamatorias o infecciosas del SNC, como ocurre en las meningitis bacterianas, virales o de otros or ge-nes, encefalitis, poliomielitis, neuros filis, esclerosis m ltiple, hemorragia cerebral, tumores cerebrales o espinales.

3 Otros des rdenes ocasionan una producci n anormal de prote nas dentro del SNC como las enfermedades sensibilidad del presente m todo lo hace apropiado para ser usado en l quidos biol gicos tales como orina y l quido cefalorraqu deo donde la concentraci n de prote nas con respecto a la del plasma es demasiado baja como para deter-minarla por m todos empleados habitualmente para DEL METODOLas prote nas presentes en la muestra reaccionan en medio cido con el complejo Rojo de Pirogalol-Molibdato originando un nuevo complejo coloreado que se cuantifica espectrofo-tom tricamente a 600 PROVISTOSA. Reactivo A: soluci n estabilizada de Rojo de Pirogalol 0,1 mmol/l, molibdato de sodio 0,1 mmol/l en buffer succi-nato 50 Standard: soluci n de alb mina 100 mg/dl (1,0 g/l).

4 REACTIVOS NO PROVISTOS- Agua Soluci n fisiol PARA SU USOR eactivos Provistos: listos para reactivos son para uso diagn stico "in vitro".Utilizar los reactivos guardando las precauciones habituales de trabajo en el laboratorio de an lisis cl los reactivos y las muestras deben descartarse de acuerdo a la normativa local vigente. ESTABILIDAD E INSTRUCCIONES DEALMACENAMIENTOR eactivos Provistos: son estables en refrigerador (2-10oC) hasta la fecha de vencimiento indicada en la Reactivo A debe protegerse de la DE INESTABILIDAD O DETERIORO DE LOS REACTIVOSC uando el espectrofot metro ha sido llevado a cero con agua destilada, lecturas de absorbancia a 600 nm del Reactivo A superiores a 0,250 o inferiores a 0,030 son indicio de deterioro del o l quido cefalorraqu deoa) Recolecci n: obtener orina ocasional o de 24 horas.

5 Medir la caso de que las muestras sean turbias, es conveniente ) Aditivos: no se ) Sustancias interferentes conocidas:- la hem lisis puede ser causa de resultados falsamente aumentados tanto en orina como en LCR;- los conservantes para orina tales como cido clorh drico, cido benzoico o timol pueden ser causas de resultados falsamente disminuidos;- algunas drogas o medicamentos pueden interferir en la reacci n. Referirse a la bibliograf a de Young para los efectos de las drogas en el presente m ) Estabilidad e instrucciones de almacenamiento: la orina puede conservarse refrigerada (2-10oC) hasta 8 d as o congelada (-20oC) hasta 3 meses.

6 El LCR puede conservarse 3 d as refrigerado (2-10oC) o 3 meses congelado (-20oC). Proti CMATERIAL REQUERIDO (no provisto)- Espectrofot metro o fotocolor metro para lecturas a 600 nm (580-620 nm).- Ba o de agua a Pipetas y micropipetas para medir los vol menes a temperatura ambiente los reactivos y las mues-tras antes de iniciar el ensayo. En tres tubos o cubetas espectrofotom tricas marcados B (Blanco), S (Standard) y D (Desconocido), colocar: B S DStandard - 20 ul -Muestra - - 20 ulReactivo A 1 ml 1 ml 1 mlMezclar e incubar los tubos durante 10 minutos a 37oC. Leer en fotocolor metro entre 580-620 nm o en espectrofo-t metro a 600 nm, llevando a cero el aparato con el DE LA MEZCLA DE REACCION FINALEl color de la reacci n es estable durante 30 minutos por lo que la absorbancia debe ser le da dentro de ese DE LOS RESULTADOS1) Prote nas en orina de 24 horas Dmg de prote nas /24 horas = x V x 1000 Ssiendo.

7 V = volumen de la diuresis expresado en litros /24 horas1000 = mg/l del Standard2) Prote nas en orina ocasional Dmg/dl prote nas = x 100 S3) Prote nas en l quido cefalorraqu deo Dmg/dl prote nas = x 100 SMETODO DE CONTROL DE CALIDADP rocesar 2 niveles de un material de control de calidad ( Proti U/LCR Control 2 niveles) con concentraciones conocidas de prote nas, con cada determinaci n. VALORES DE REFERENCIAO rina de 24 horas: 30-140 mg/24 horas (hasta 160 mg/24 horas en embarazadas)Orina ocasional: 25 mg/dlLCR: 15-45 mg/dl en personas sanas. En personas de m s de 60 a os, este rango se extiende hasta 60 valores son orientativos.

8 Es conveniente que cada laboratorio establezca sus propios rangos, dado que pue-den variar de acuerdo a la poblaci n de pacientes y a las condiciones del DE UNIDADES AL SISTEMA SIProte nas (mg/dl) x 10 = Prote nas (mg/l)LIMITACIONES DEL PROCEDIMIENTOVer Sustancias interferentes conocidas en el Reactivo A de la material empleado debe estar libre de tensioactivos, caso contrario se obtendr n valores ) Reproducibilidad: procesando replicados de las mismas muestras en un mismo d a se mg/dl 0,66 mg/dl4,7 %100 mg/dl 2,30 mg/dl2,3 % b) Sensibilidad: en espectrofot metro a 600 nm, un Stan-dard de 100 mg/dl proporciona una lectura de aproximada-mente 0,200 , lo que significa que para 0,001 el m nimo cambio de actividad detectable ser de 0,5 ) Linealidad: la reacci n es lineal hasta 150 mg/dl de pro-te nas.

9 Para valores superiores, diluir la muestra 1:2 1:4 con soluci n fisiol gica y repetir la determinaci n. Corregir los c lculos multiplicando por el factor de diluci n se desea aumentar la sensibilidad anal tica en muestras normales o levemente aumentadas, pueden emplearse 50 ul de muestra. En este caso, es preferible diluir el Standard 1:2 (1+1) con agua destilada, y usar este standard de 50 mg/dl en la prueba, de tal manera de ajustar la calibraci n a los valores normales PARA ANALIZADORES AUTOMATICOSPara las instrucciones de programaci n consulte el manual del usuario del analizador en 1 x 100 ml (C d. 1690007).

10 - 4 x 20 ml (C d. 1009317).- 4 x 20 ml (C d. 1009282).- 2 x 60 ml (C d. 1009631).- 2 x 60 ml (C d. 1009939).BIBLIOGRAFIA- Watanabe, N.; et al. - Clin. Chem. 32:1551, Fujita, Y.; Mori, I.; Kitano, S. - Benseki Kagaku 32:379, Watson, M.; Scott, M. - Clin Chem. 41/3:343, Killingsworth, L. - Clin. Chem. 28/5:1093, Orsonneau, J.; Douet, P.; Massoubre, C; Lustenberger, P.; Bernard, S. - Clin. Chem. 35/11:2233, Young, - "Effects of Drugs on Clinical Laboratory Tests", AACC Press, 4th ed., Rosario - ArgentinaM Wiener Laboratorios 29442000 - Rosario - T c.: Viviana E. C tolaBioqu micaProducto Autorizado Cert.