Colinesterasa C AA - Wiener lab.

1 864114524 / 00 p. 1/12 Colinesterasa SIGNIFICACION CLINICASe ha demostrado la existencia de dos colinesterasas: una es la acetilcolinesterasa o Colinesterasa verdadera (acetil colina hidrolasa, EC. ) que se encuentra en eritroci-tos y terminaciones de nervios colin rgicos, y la otra es la butirilcolinesterasa o pseudocolinesterasa (EC. ) que se encuentra en plasma, h gado, m sculo liso y Colinesterasa del suero o plasma (Che) o pseudocolines-terasa est asociada a las siguientes condiciones cl nicas:1) Constituye un ndice de funci n hep tica, especialmente en hepatopat as cr nicas. Se observa una buena correlaci n entre el aumento de GOT (AST) y la disminuci n de Che, en hepatitis ) Su disminuci n indica intoxicaci n por insecticidas orga-nofosforados, inhibidores de la ) En algunos individuos sensibles a la succinilcolina, rela-jante muscular administrado durante la anestesia, se observa una apnea post-anest sica prolongada y en algunos casos, fatal.

2 Esto coincide con la presencia de una variante gen tica de la Che ("at pica") incapaz de hidrolizar a la succinilcolina. En sujetos normales, esta droga es hidrolizada "in vivo" por la Che, en 1 a 4 minutos, por eso la apnea tambi n se relaciona con bajos niveles de Che m todos de inhibici n diferencial que permiten de-tectar a sujetos portadores de Colinesterasa at DEL METODO Chebutiriltiocolina + H2O tiocolina + butiratotiocolina + DTNB 2-nitro-5-mercaptobenzoatoREACTIVOS PROVISTOSA. Reactivo A: viales conteniendo cido 5,5'-ditiobis-2-nitro-benzoico (DTNB) en buffer fosfatos para un pH final de la mezcla de reacci n de 7, Reactivo B: viales conteniendo ioduro de S-butiriltiocolina (IBTC).

3 C. Reactivo C: soluci n acuosa reconstituyente del Reactivo A, con conservantes Reactivo D: soluci n acuosa reconstituyente del Reactivo B, con conservantes finalesIBTC ..6 mmol/lDTNB ..0,25 mmol/lBuffer fosfatos ..50 mmol/l; pH 7,7 REACTIVOS NO PROVISTOSS oluci n fisiol PARA SU USOR eactivo A; preparaci n: agregar la cantidad de Reactivo C indicada en el r tulo. Homogeneizar por inversi n hasta disoluci n completa y B; preparaci n: agregar la cantidad de Reactivo D indicada en el r tulo. Homogeneizar por inversi n hasta disoluci n completa y C y D: listos para reactivos son para uso diagn stico "in vitro".Utilizar los reactivos guardando las precauciones habituales de trabajo en el laboratorio de qu mica cl los reactivos y las muestras deben descartarse de acuerdo a la normativa local vigente.

4 ESTABILIDAD E INSTRUCCIONES DEALMACENAMIENTOR eactivos Provistos: estables en refrigerador (2-10oC) hasta la fecha de vencimiento indicada en la caja. Reactivo A reconstituido: estable 6 semanas en refrigera-dor (2-10oC). Conservar protegido de la B reconstituido: estable 6 semanas en refrigera-dor (2-10oC). No debe permanecer C y D: una vez abiertos, no deben permanecer destapados ni fuera del refrigerador por per odos prolonga-dos. Evitar o plasmaa) Recolecci n: obtener la muestra de la manera ) Aditivos: en caso de emplear plasma como muestra, se recomienda el uso de heparina o EDTA (Anticoagulante W de Wiener lab.) como anticoagulantes para su obtenci ) Sustancias interferentes conocidas: no se observan interferencias por bilirrubina hasta 200 mg/l, triglic ridos hasta 25 g/l, hemoglobina hasta 1000 mg/dl ni heparina hasta 50 U/ml de sangre a la bibliograf a de Young para los efectos de las drogas en el presente m ) Estabilidad e instrucciones de almacenamiento: la muestra debe ser preferentemente fresca.

5 Puede conser-varse hasta una semana en el refrigerador (2-10oC), sin agregado de REQUERIDO (no provisto)- Espectrofot Micropipetas y pipetas para medir los vol menes Cubetas espectrofotom tricas de caras la determinaci n de Colinesterasa en suero o plasmaAAC864114524 / 00 p. 2/12- Tubos de Kahn o hem Ba o de agua a la temperatura de reacci n Cron DE REACCION- Longitud de onda: 405 nm- Temperatura de reacci n: 25, 30 37oC. La temperatura de la mezcla de reacci n debe ser estrictamente mante-nida a la temperatura seleccionada. Ver los VALORES DE REFERENCIA correspondientes a cada Tiempo de reacci n: 3 minutos- Volumen de muestra: 10 ul- Volumen final de reacci n: 1,51 mlLos vol menes de muestra y reactivos pueden variarse proporcionalmente, sin que se alteren los factores de c la cantidad necesaria de Reactivo B recons-tituido, a la temperatura seleccionada durante algunos minutos.

6 En una cubeta mantenida a la temperatura elegida, colocar:Reactivo A reconstituido 1,2 mlPreincubar 2 minutos. Luego agregar:Muestra 10 ulHomogeneizar e inmediatamente agregar:Reactivo B reconstituido 0,3 mlMezclar, incubar 15 segundos y leer la absorbancia dispa-rando simult neamente el cron metro. Volver a leer luego de 30 y 60 segundos exactos. Determinar la diferencia promedio de absorbancia cada 30 segundos ( A/30 seg) restando cada lectura de la anterior y promediando los valores. Utilizar este promedio para los c DE LOS RESULTADOSC olinesterasa (U/l) = A/30 seg x 22210 VALORES DE REFERENCIA 25oC 30oC* 37oC*Ni os, hombres y mujeres de m s de 40 a os: 3500-8500 U/l 4300-10500 U/l 5500-13400 U/lMujeres entre 16-39 a os, no embarazadas y que no toman anticonceptivos orales: 2800-7400 U/l 3450-9100 U/l 4400-11700 U/lMujeres entre 18-41 a os, embarazadas o tomando anti-conceptivos orales: 2400-6000 U/l 3000-7400 U/l 3800-9500 U/l* Valores calculados empleando los siguientes factores de conversi n de temperaturas:25-30oC: 1,23 25-37oC.

7 1,58Se recomienda que cada laboratorio establezca sus propios valores de DE UNIDADES AL SISTEMA SIColinesterasa (kU/l) = Colinesterasa (U/l) x 0,001 METODO DE CONTROL DE CALIDADP rocesar 2 niveles de un material de control de calidad (Standatrol S-E 2 niveles) con actividades conocidas de Colinesterasa , con cada determinaci DEL PROCEDIMIENTOVer Sustancias interferentes conocidas en preservar la integridad de los reactivos deben evitarse todo tipo de contaminaciones, empleando para la medici n nicamente micropipetas perfectamente limpias y ) Precisi n: procesando de acuerdo al protocolo EP5A del NCCLS (National Committee on Clinical Laboratory Standards), se obtuvo lo siguiente:Precisi n U/l 100,75 U/l1,14 %4811 U/l 46,69 U/l0,97 %Precisi n U/l 177,68 U/l2,00 %4811 U/l 94,79 U/l1,97 %b) L mite de detecci n: depende del fot metro empleado y de la longitud de onda.

8 En espectrofot metros con cubetas de caras paralelas de 1 cm de espesor, para un A/30 seg de 0,001 el m nimo cambio de actividad detectable ser de 22 ) Rango din mico: si A/30 seg es superior a 0,400, se debe repetir la determinaci n con Muestra diluida 1/2 con soluci n fisiol gica, corrigiendo consecuentemente los ) Linealidad: la reacci n es lineal hasta 17000 U/l. Para valores superiores, diluir la muestra con soluci n fisiol gica, repetir la determinaci n y multiplicar el resultado por el factor de diluci PARA ANALIZADORES AUTOMATICOSPara las instrucciones de programaci n, consulte el manual del usuario del analizador en ml: 3 x 20 ml Reactivo A 3 x 6 ml Reactivo B 1 x 60 ml Reactivo C 1 x 20 ml Reactivo D(C d.

9 1241403)BIBLIOGRAFIA- Szasz, G. - Clin. Chim. Acta 19:191 (1968).- Knedel, M. y B ttger, R. - Klin. Wochr. 45/325 (1967).864114524 / 00 p. 3/12- Dietz, et al. - Clin. Chem. 19/11:1309 (1973).- den Blaauwen, et al. - J. Clin. Chem. Biochem. 21/6:381 (1983).- Ellman, G. - Archives of Biochemistry and Biophysics 82:70 (1959).- Newman, , Que Hee - Clin. Chem. 30/2:308 (1984).- Tietz Textbook of Clinical Chemistry - Burtis, C.; Ashwood, E. (3 Edition) WB Saunders, Young, - "Effects of Drugs on Clinical Laboratory Tests", AACC Press, 3rd ed., NCCLS (National Committee for Clinical Chemistry Stan-dards) - Document "Evaluation of the Linearity of Quantita-tive Analytical Methods", EP6-P (1986).

10 - NCCLS (National Committee for Clinical Chemistry Stan-dards) - Document "Evaluation of Precision Performance of Clinical Laboratory Devices", EP5-A (1999).S MBOLOSLos siguientes s mbolos se utilizan en todos los kits de reactivos para diagn stico de Wiener lab. CEste producto cumple con los requerimientos previstos por la Directiva Europea 98/79 CE de productos sanitarios para el diagn stico "in vitro"PRepresentante autorizado en la Comunidad EuropeaVUso diagn stico "in vitro"XContenido suficiente para <n> ensayosHFecha de caducidadlL mite de temperatura (conservar a)No congelarFRiesgo biol gicoVolumen despu s de la reconstituci nContenidogN mero de loteMElaborado por:NocivoCorrosivo / C usticoIrritanteiConsultar instrucciones de usoCalibradorControlbbControl PositivocControl NegativohN mero de cat logo / 00 p.