Guide de validation des - Anses

1 Anses P le Recherche et R f rence Page 1 67 pages Anses /PR3/07/01 version a Date : 28 octobre 2015 Guide de validation des m thodes d analyses Ce Guide est destin aux laboratoires de l Anses dans le cadre des travaux sur les m thodes d analyse quantitatives ou qualitatives qu ils d veloppent, adaptent ou optimisent dans l ex cution de leurs missions de laboratoires de r f rence nationaux ou de l union europ enne. Il est accompagn d un glossaire des termes relatifs la validation des m thodes. Anses P le Recherche et R f rence Page 2 67 pages Sommaire Table des figures .. 5 Table des tableaux .. 6 1. Avant-propos .. 7 2 Contexte et objectifs du Guide .. 7 3. Domaine d application .. 8 Cycle de vie d une m thode .. 8 P rim tre du Guide .. 9 4. Documents de r f rence .. 10 5. Glossaire .. 11 6. D marche de validation .. 13 Expression du besoin (cahier des charges du client/prescripteur) .. 14 Caract risation.

2 16 Caract risation par approche modulaire .. 16 Approche globale versus approche par caract ristique par caract ristique .. 16 Caract risation absolue versus caract risation relative .. 18 Caract risation intra-laboratoire versus interlaboratoires .. 18 validation .. 18 7. Caract risation des performances des m thodes .. 19 Pr requis statistiques .. 19 Donn es qualitatives .. 19 Type de donn es .. 19 Tableau de contingence .. 19 M thodes quantitatives .. 20 Les supports de caract risation .. 20 Types de supports de caract risation .. 20 Qualit .. 20 Repr sentativit .. 21 Les supports de caract risation positifs .. 21 Les supports de caract risation n gatifs .. 22 Les n gatifs ou blancs .. 22 Les analytes non cibles .. 22 Caract ristiques de performance d terminer selon le type de m thode .. 23 Modalit s pratiques de caract risation .. 24 Sp cificit .. 24 Sensibilit .. 25 Anses P le Recherche et R f rence Page 3 67 pages Fonction d talonnage/Efficacit (PCR).

3 25 Lin arit .. 25 Justesse .. 25 Fid lit .. 26 R p tabilit .. 26 Fid lit interm diaire .. 27 Reproductibilit .. 27 Exactitude .. 27 Limites .. 27 Limite de d tection .. 28 Limite de quantification .. 28 Autres types de limites .. 29 Outils de calculs pour la validation .. 29 8 Ad quation de la performance et validation .. 29 La d marche .. 29 Mod le de m thode d analyse .. 30 Rapport de validation .. 30 9 Incertitude .. 30 10 Perspectives .. 34 11 R f rences bibliographiques .. 34 Annexe Membres du groupe GT Val 2 .. 36 Annexe Bases statistiques pour les variables quantitatives .. 37 Annexe Sp cificit .. 41 Annexe Sensibilit .. 42 Annexe Fonction d talonnage/Efficacit (PCR) .. 44 Annexe Justesse .. 46 Annexe Fid lit .. 48 R p tabilit .. 49 Fid lit interm diaire .. 49 Reproductibilit .. 50 Annexe Exactitude .. 51 Exemple d application : dosage de l acrylamide dans le plasma de porc .. 53 Annexe Limites.

4 59 Limite de d tection .. 59 Limite de quantification .. 62 Anses P le Recherche et R f rence Page 4 67 pages Annexe Incertitude .. 63 Utilisation de l incertitude largie dans la prise de d cision .. 63 Calcul d incertitude .. 64 Mod lisation de l incertitude .. 65 Anses P le Recherche et R f rence Page 5 67 pages Table des figures Figure 1 - Cycle de vie d une m thode d analyse 8 Figure 2 - Illustration des notions de s ries, niveaux et r p titions 13 Figure 3 - Sch ma de l expression du besoin et de ses cons quences entre le client / laboratoire 15 Figure 4 - Illustration de la m thodologie de caract risation des caract ristiques de performance tudi es s par ment 17 Figure 5 - Illustration de la m thodologie de caract risation des caract ristiques de performance bas e sur un crit re unique 17 Figure 6 - Composantes croissantes de la variabilit : r p tabilit , fid lit interm diaire et reproductibilit 26 Figure 7 - Processus d valuation de l incertitude 31 Figure 8 - Principales sources d incertitudes et chapitres correspondants dans la norme NF EN ISO/CEI 17025 32 Figure 9 - Exemple d informations fournies par une repr sentation graphique box plot 37 Figure 10 - Exemple de variances non homog nes 38 Figure 11 - Choix du facteur de pond ration (w) en fonction de la relation entre la variance et le niveau de concentration 39 Figure 12 - Hypoth ses statistiques requises pour les variables quantitatives 40 Figure 13 - Exemple de distributions de r sidus (valeurs trouv es - valeurs attendues) obtenues pour diff rents mod les d talonnage 45 Figure 14 - Exemple de droite de justesse et son intervalle de confiance 47 Figure 15 Illustration d un profil d exactitude 52 Figure 16 Dosage d acrylamide dans le plasma de porc.

5 Donn es brutes observ es 54 Figure 17 - Profil d exactitude r alis avec les donn es brutes 55 Figure 18 - Droite de r gression entre les concentrations introduites et les concentrations en retour 56 Figure 19 - Profil d exactitude r alis avec les donn es corrig es 57 Figure 20 - Importance de l incertitude dans la prise de d cision 63 Figure 21 - Mod lisations par une fonction puissance du profil d incertitude 66 Anses P le Recherche et R f rence Page 6 67 pages Table des tableaux Tableau 1 - Synth se des r sultats obtenus sous forme de tableau de contingence 20 Tableau 2 - Caract ristiques de performance d terminer pour les m thodes qualitatives et les m thodes quantitatives 23 Tableau 3 - Synth se tabulaire des caract ristiques de performances, de leurs valeurs pr d termin es, de leurs valeurs obtenues et de la d cision sur leur validit 29 Tableau 4 - Synth se des r sultats obtenus lors de l tude de caract risation des performances 41 Tableau 5 - Intervalle de confiance 95% d un pourcentage de Sp 42 Tableau 6 Synth se des r sultats obtenus lors de l tude de caract risation des performances 43 Tableau 7 - Mod les usuels de fonctions d talonnages, calcul du mod le inverse, nombre minimal de niveau n cessaires.

6 De r p titions par niveaux et nombre minimal de s ries pour tablir ce mod le 44 Tableau 8 - Diff rentes expressions de la justesse 46 Tableau 9 - R sultats des calculs du profil d exactitude apr s correction des donn es brutes 57 Tableau 10 - Nombre de r p titions positives par niveau 60 Tableau 11 - Ensemble des performances obtenues pour d terminer les teneurs d acrylamide dans le plasma de porc 65 Anses P le Recherche et R f rence Page 7 67 pages Avant-propos Le pr sent Guide a t r dig par le groupe de travail GT Val 2 constitu sur d cision du directeur g n ral n 2013/005. Les participants sont list s dans l annexe Membres du groupe GT Val 2 . Dans le cadre de ce GT, une attention particuli re a t donn e la repr sentation de chacun des domaines d activit de l Agence. Ce Guide est destin l usage des laboratoires de l Anses dans le cadre des travaux de d veloppement, d adaptation ou d optimisation de m thodes d analyse r sultant de leurs missions de laboratoires de r f rence nationaux ou de l Union europ enne.

7 Ce Guide donne des lignes directrices g n rales sur le processus de validation d une m thode, propose des modalit s pratiques de caract risation des performances, en pr sentant pour chaque caract ristique des exemples concrets. Ce Guide ne se substitue pas aux r f rentiels r glementaires ou normatifs applicables aux diff rents domaines d activit de l Agence et utilis s dans les laboratoires. Pour l laboration de ce document et conform ment son mandat, le groupe de travail s est attach prendre en compte les diff rents types de m thodes (qualitative et quantitative) et exploiter les documents d j en vigueur au sein de l Agence, sur la base d un recensement effectu aupr s des laboratoires. Il a pris en compte les plus r centes volutions normatives sur ce sujet et a veill la compatibilit de ses recommandations avec les r gles de l accr ditation propos es par le Comit fran ais d accr ditation (Cofrac). La parution de ce Guide s accompagne de la mise disposition de documents associ s qui ont t labor s parall lement par le groupe de travail, afin de faciliter la mise en application de certaines de ses recommandations sur une base harmonis e.

8 Il s agit : d un glossaire des termes relatifs la validation des m thodes Anses /PR3/7/01-01 ; d un mod le-type pour la r daction de m thodes d analyses en vue de leur publication Anses /PR3/7/01-04, accompagn d un Guide d utilisation Anses /PR3/7/01-05 ; d un mod le de rapport de validation de m thode Anses /PR3/7/01-02. Ce Guide ainsi que ses documents associ s sont destin s tre r vis s r guli rement pour prendre en compte les volutions normatives et les retours d exp rience des laboratoires de l Anses . 2 Contexte et objectifs du Guide D s sa cr ation en 2011, le coll ge de la r f rence de l Anses a identifi le th me de la validation des m thodes d analyse parmi les sujets n cessitant un partage des pratiques et la d finition d orientations communes pour les laboratoires de l Anses . Un premier groupe de travail a propos un processus g n ral de d veloppement de m thode adapt au contexte de la r f rence, la d finition d une terminologie commune et la publication des m thodes destin es tre rendues officielles sur le site de l Agence.

9 Ces travaux avaient galement mis en vidence la n cessit d approfondir plusieurs sujets, parmi lesquels figurent les aspects suivants : - les modalit s de caract risation des performances d une m thode d analyse ; - la constitution harmonis e des dossiers de validation ; Anses P le Recherche et R f rence Page 8 67 pages - la d termination d une trame commune pour les m thodes d analyses de l Anses en vue de leur publication (au sens mise disposition), apr s officialisation le cas ch ant. L enqu te de satisfaction men e en 2012 aupr s des laboratoires agr s a confirm le bien-fond de ces axes compl mentaires de travaux. En effet, ces laboratoires ont exprim plusieurs attentes de la part des laboratoires nationaux de r f rence (LNR) concernant les modalit s de communication et d information des m thodes qui leur sont transf r es : contenu des dossiers de validation , incluant leur ad quation avec les exigences du Cofrac ; modalit s de transfert et d appui technique ; modalit s de diffusion des Le pr sent Guide a pour objectif d harmoniser au sein de l Anses , dans le contexte des missions attach es aux mandats de r f rence, la d marche de mesure des performances (ou caract risation) des m thodes analytiques, de validation de ces performances et de publication des m thodes ainsi valid es.

10 Il ne pr sente que des recommandations dans le cadre de conditions id ales de caract risation et qui peuvent ou doivent tre adapt es en fonction des conditions r elles de terrain, de disponibilit de mat riel, de couple h te/matrice, le cas ch ant de l urgence de l valuation/ validation , et des r f rentiels en vigueur dans les diff rents domaines d activit .. 3. Domaine d application Cycle de vie d une m thode La vie d une m thode d analyse est un processus volutif qui suit diff rentes tapes [H rau V. et al. (2013), Feinberg (2009)] pouvant tre repr sent es par un cycle (figure 1) : Figure 1 - Cycle de vie d une m thode d analyse. (D apr s Max Feinberg, 2009, modifi par le groupe GT Val 2) les principales tapes de ce cycle sont les suivantes : Expertise de l'analyste1. S veloppementa) choix des analytesb) type de m thodec) Type de risation *test de robustessea) Optimisation de l'appareillageb) Optimisationdu mode op ratoirec) Modeop atoire normalis proc dure de validationCartes de contr leEssai d'aptitudeOptionnelOptimisationPlan d'exp riencesCaract ristiques de performance : voir tableau6.