Bilirrubina Total C AA - Wiener lab.

1 861270024 / 01 p. 1/9M todo DPD para la determinaci n de Bilirrubina Total en suero o plasmaAABilirrubina Total LINEA LIQUIDASIGNIFICACION CLINICALa Bilirrubina , compuesto de degradaci n de la hemoglobina, es captada por el h gado para su conjugaci n y excreci n en la bilis. Las alteraciones hepatocelulares u obstrucciones biliares pueden provocar eritroblastosis fetal o anemia hemol tica del reci n nacido es una patolog a provocada por incompatibilidad materno-fetal en la que se produce una destrucci n excesiva de gl bulos rojos. Esto resulta en un severo aumento de la Bilirrubina s rica con el consecuente riesgo de difusi n del pigmento al sistema nervioso central produciendo toxicidad, por lo que la determinaci n de la Bilirrubina en estos ni os reci n nacidos resulta sumamente DEL METODOLa Bilirrubina indirecta, unida a la alb mina, es liberada por un tensioactivo.

2 La Bilirrubina Total reacciona con la sal de diclorofenildiazonio (DPD) formando un azocompuesto de color rojo en soluci n PROVISTOSA. Reactivo A: soluci n acuosa conteniendo cido clorh -drico 150 mmol/l y Reactivo B: soluci n acuosa conteniendo sal de diclo-rofenildiazonio 1,5 mmol/l en cido clorh drico 150 NO PROVISTOSC alibrador A plus de Wiener PARA SU USOR eactivos Provistos: listos para usar. Antes de utilizar, mezclar por inversi n. El Reactivo B puede presentar una ligera turbidez que no afecta su reactivos son para uso diagn stico "in vitro". Los reactivos son corrosivos. H315 + H320: Provoca irritaci n cut nea y ocular. H314: Provoca quemaduras graves en la piel y lesiones oculares graves. P262: Evitar el contacto con los ojos, la piel o la ropa. P305 + P351 + P338: EN CASO DE CONTACTO CON LOS OJOS: Enjuagar cuidadosamente con agua durante varios minutos.

3 Quitar las lentes de contacto, si lleva y resulta f cil. Seguir enjuagando. P302 + P352: EN CASO DE CONTAC-TO CON LA PIEL: Lavar con agua y jab n abundantes. P280: Llevar guantes/prendas/gafas/m scara de protecci los reactivos guardando las precauciones habituales de trabajo en el laboratorio de an lisis cl los reactivos y las muestras deben descartarse de acuerdo a la normativa local E INSTRUCCIONES DEALMACENAMIENTOR eactivos Provistos: estables en refrigerador (2-10oC) hasta la fecha de vencimiento indicada en la o plasmaa) Recolecci n: obtener de la manera habitual. Proteger de la luz natural o artificial envolviendo el tubo con papel ) Aditivos: en caso de que la muestra sea plasma, debe usarse heparina o EDTA para su obtenci ) Sustancias interferentes conocidas: no se observan interferencias por hem lisis hasta una concentraci n de hemoglobina de 500 mg/dl (0,5 g/dl) ni lipemia hasta una concentraci n de 500 mg/dl (5 g/l) de triglic ridos.

4 No obs-tante, muestras hiperlip micas o con hem lisis moderada pueden conducir a resultados err a la bibliograf a de Young para los efectos de las drogas en el presente m ) Estabilidad e instrucciones de almacenamiento: la muestra debe ser preferentemente fresca. En caso de no efectuarse el ensayo en el momento, la muestra puede conservarse hasta 48 horas en refrigerador (2-10oC). La acci n de la luz es capaz de destruir hasta un 50% de la Bilirrubina presente en la muestra, por lo que debe protegerse REQUERIDO (no provisto)- Espectrofot metro- Micropipetas y pipetas para medir los vol menes indicados- Cron metro- Analizador autom ticoCONDICIONES DE REACCION- Longitud de onda: 546 nm (520 - 550 nm)- Temperatura de reacci n: 25oC (30oC o 37oC)- Tiempo de reacci n: 5 minutos 30 segundos- Volumen de muestra: 80 ul- Volumen final de reacci n: 1,28 mlPROCEDIMIENTOEn 3 tubos marcados BR (Blanco de Reactivos), BM (Blanco de Muestra/Calibrador/Control) y M (Muestra/Calibrador/Control), colocar: BR BM MReactivo A 1 ml 1,2 ml 1 mlAgua destilada 80 ul - -C861270024 / 01 p.

5 2/9 Muestra - 80 ul 80 ulMezclar e incubar exactamente 30 segundos. Luego agregar:Reactivo B 0,2 ml - 0,2 mlMezclar e incubar 5 minutos. Inmediatamente despu s, leer en espectrofot metro a 546 nm (520 - 550 nm), llevando a cero el aparato con el Blanco de Reactivo (BR). Lectura 1 (DO1): BM (Blanco de Muestra o BC (Blanco de Calibrador). Lectura 2 (DO2): M (Muestra) o C (Calibrador).ESTABILIDAD DE LA MEZCLA DE REACCION FINALEl color de la reacci n es estable durante 30 segundos, por lo que la absorbancia debe ser le da dentro de ese DE LOS RESULTADOSB ilirrubina Total (mg/l) = (DO2 M - DO1 BM) x fdonde: X* mg/lf = DO2 C - DO1 BC(*) concentraci n de Bilirrubina Total en el Calibrador A plus de Wiener lab. METODO DE CONTROL DE CALIDADP rocesar 2 niveles de un material de control de calidad (Standatrol S-E 2 niveles) con concentraciones conocidas de Bilirrubina Total , con cada determinaci DE REFERENCIAB ilirrubina Total en suero o plasma:- Adultos: hasta 10 mg/l- Reci n nacidos.)

6 Nacidos a t rmino PrematurosSangre de cord n < 20 mg/l < 20 mg/lhasta las 24 hs 14 - 87 mg/l < 80 mg/lhasta las 48 hs 34 - 115 mg/l < 120 mg/ldel 3 al 5 d a 15 - 120 mg/l < 160 mg/l Los valores comienzan luego a disminuir para alcanzar el nivel promedio del adulto al mes del los prematuros, los niveles tardan m s en alcanzar la normalidad, dependiendo del grado de inmadurez hep recomienda que cada laboratorio establezca sus propios valores de DE UNIDADES AL SISTEMA SIBilirrubina (umol/l) = Bilirrubina (mg/l) x 1,71 LIMITACIONES DEL PROCEDIMIENTOVer Sustancias interferentes conocidas en acci n de la luz, tanto sobre las muestras como sobre las soluciones standard, es capaz de destruir en una hora hasta el 50% de la Bilirrubina ) Reproducibilidad: se aplic el protocolo EP15-A del CLSI. Se analizaron tres niveles de concentraci n, cada uno por cuadruplicado durante 5 d as.

7 Con los datos obtenidos, se calcularon la precisi n intraensayo y n intraensayo (n = 20) ,5 mg/l 0,28 mg/l3,29%46,1 mg/l 0,31 mg/l0,67%164,5 mg/l 1,21 mg/l0,74%Precisi n Total (n = 20) ,5 mg/l 0,30 mg/l3,53%46,1 mg/l 0,77 mg/l1,67%164,5 mg/l 3,15 mg/l1,92%b) Linealidad: la reacci n es lineal hasta 250 mg/l de bili-rrubina. Para valores superiores, repetir la determinaci n empleando muestra diluida 1:2 1:4 con soluci n fisiol gica, multiplicando el resultado obtenido por 2 4 seg n el ) L mite de detecci n: depende del fot metro empleado y de la longitud de onda. En espectrofot metros con cube-tas de caras paralelas de 1 cm de espesor, para un A de 0,001 el m nimo cambio de concentraci n detectable ser de 0,031 PARA ANALIZADORES AUTOMATICOSPara las instrucciones de programaci n consulte el manual del usuario del analizador en uso.

8 Para la calibraci n, debe usarse Calibrador A plus de Wiener ml: 4 x 35 ml Reactivo A 4 x 7 ml Reactivo B(C d. 1008115)*240 ml: 4 x 50 ml Reactivo A 2 x 20 ml Reactivo B(C d. 1120008)240 ml: 4 x 50 ml Reactivo A 2 x 20 ml Reactivo B(C d. 1009334)240 ml: 4 x 50 ml Reactivo A 2 x 20 ml Reactivo B(C d. 1009244)240 ml: 4 x 50 ml Reactivo A 2 x 20 ml Reactivo B(C d. 1009605)240 ml: 4 x 50 ml Reactivo A 2 x 20 ml Reactivo B(C d. 1009913)BIBLIOGRAFIA- Burtis, ; Ashwood, - Tietz Fundamentals of Clin. Chem. 5th Ed.: 966, 2001.* Marcado CE pendiente861270024 / 01 p. 3/9 SIMBOLOSLos siguientes s mbolos se utilizan en todos los kits de reactivos para diagn stico de Wiener lab. CEste producto cumple con los requerimientos previstos por la Directiva Europea 98/79 CE de productos sanitarios para el diagn stico "in vitro"PRepresentante autorizado en la Comunidad EuropeaVUso diagn stico "in vitro"XContenido suficiente para <n> ensayosHFecha de caducidadlL mite de temperatura (conservar a)No congelarFRiesgo biol gicoVolumen despu s de la reconstituci nContenidogN mero de loteMElaborado por:NocivoCorrosivo / C usticoIrritanteiConsultar instrucciones de usoCalibradorControlbbControl PositivocControl NegativohN mero de cat logo Calibr.

9 Weigl, E.; Bach, H.; Krieg, D. - Med. Klin. 70/15:664 (1975).- Young, - "Effects of Drugs on Clinical Laboratory Tests", AACC Press, 5th ed., CLSI: Clinical and Laboratory Standards Institute (ex-NCCLS) - Protocols EP 15A, 2001 / EP 17A, Tietz Textbook of Clinical Chemistry - Saunders Co., 3rd ed. (2001).861270024 / 01 p. 4/9 M todo DPD para a determina o de Bilirrubina Total em soro ou plasmaSIGNIFICADO CL NICOA Bilirrubina , composto produzido pela degrada o da he-moglobina, captado pelo f gado para sua conjuga o e excre o biliar. As altera es hepatocelulares e obstru es biliares podem provocar eritroblastose fetal ou anemia hemol tica do rec m nascido uma patologia provocada pela incompatibilidade materno-fetal. Nestas patologias se produz a destrui o massiva de gl bulos vermelhos que resulta num consider vel aumento da Bilirrubina s rica com o conseq ente risco de espalhar-se o pigmento ao sistema nervoso central, produzindo toxicidade.

10 Por m, a de-termina o de Bilirrubina no rec m nascido muito DO M TODOA Bilirrubina indireta, unida albumina, liberada por um tensoati-vo. A Bilirrubina Total reage com o sal de diclorofenildiazonio (DPD) produzindo um azo composto cor vermelho em solu o FORNECIDOSA. Reagente A: solu o aquosa contendo cido clor drico 150 mmol/l e Reagente B: solu o aquosa contendo sal de diclorofe-nildiazonio 1,5 mmol/l em cido clor drico 150 N O FORNECIDOSC alibrador A plus da Wiener ES DE USOR eagentes Fornecidos: prontos para uso. Antes de utilizar, misturar por invers o. O Reagente B pode desenvolver turbidez que n o afeta a sua ESOs reagentes s o para uso diagn stico "in vitro".Os reagentes s o corrosivos. H315+H320 Provoca irrita o cuta nea e ocular. H314 Provoca queimaduras na pele e les es oculares graves. P262 N o pode entrar em contacto com os olhos, a pele ou a roupa.