Las tinciones básicas en el laboratorio de microbiología

1 10 Investigaci n en tinciones b sicas en el laboratorio de microbiolog aLuis Esa L pez-J come,* Melissa Hern ndez-Dur n,* Claudia Adriana Col n-Castro,* Silvestre Ortega-Pe a,* Guillermo Cer n-Gonz lez,* Rafael Franco-Cendejas* * laboratorio de Infectolog a, Centro Nacional de Inves-tigaci n y Atenci n a Que-mados (CENIAQ), Instituto Nacional de Rehabilitaci n para correspondencia:Rafael Franco Cendejas,Calz. M xico-Xochimilco N m. 289 Col. Arenal de Guadalupe, 14389 Del. Tlalpan, Ciudad de M xico, DFTel: +52 (55) 59991000, ext. 14801E-mail: 3 de junio de : 4 de octubre de art culo puede ser consultado en versi n completa en: tinciones en microbiolog a son las primeras herramientas que se utilizan en el laboratorio para el diagn stico de las enfermedades infecciosas. Desde hace m s de un siglo han ayudado a resolver problemas de etiolog a microbiana. Hay una gran variedad de tinciones , que se han ido desarrollando para la detecci n de los diferentes agentes infecciosos en los que se incluyen bacterias, par sitos y hongos.

2 La tinci n de Gram se considera b sica en la valoraci n inicial de muestras para an lisis bacteriol gico, mientras que la tinci n de Wright se ocupa para el diagn stico de enfermedades muy particulares en el rubro de la parasitolog a. Hay t cnicas tintoriales espec ficas de gran utilidad, como la tinci n de Ziehl-Neelsen, que se utiliza para el diagn stico de enfermedades cr nicas como la tuberculosis o la actinomicosis, o la tinci n de azul de lactofenol, que preserva e identifica a los componentes estructurales de los hongos. Las diferentes tinciones en el laboratorio microbiol gico tienen una utilidad fundamental para el diagn stico y tratamiento oportuno de m ltiples patolog as de etiolog a in microbiology lab are the first tools employed for diagnosis of infectious diseases. Stains have helped to identify the ethiology of microbial involvement for more than a century. As the wide spectrum of stains is currently in progress for the detection of bacteria, fungus and parasites, such fundamentals as the Gram stain are still considered basic for initial evaluation of bacteriological samples, while the Wright stain is used for very particular diseases as those related to parasites.

3 Other specific tintorial methods as the Ziehl-Neelsen stain are used for diagnosis of chronic diseases such as tuberculosis oractinomycosis. The lactophenol blue stain is best employed for diagnosis of fungal infections, as it helps to identify fungi and to preserve their morphological structures. Different stains in the clinical microbiological lab are permanent basic tools for the diagnosis and treatment of many diseases of infectious culo de revisi nVol. 3, N m. 1 Enero-Marzo 2014pp 10-18 Palabras clave: Tinci n, microorganismo, microbiolog a, colorante de Gram, Wright, Ziehl-Neelsen, azul de words: Laboratory stains, microorganism, microbiology, Gram, Wright, Ziehl-Neelsen, lactophenol nEn microbiolog a el microscopio se utiliza de forma rutinaria, ya que proporciona importante informaci n para la identifi caci n temprana y defi nitiva de los En la valoraci n de las muestras, es trascendente el poder de resoluci n del microscopio, el cual se defi ne como la capacidad que posee un objetivo para distinguir la distancia m nima entre dos puntos del objeto para que se puedan visualizar como dos puntos separados.

4 El poder de resoluci n de un objetivo es el responsable de la calidad, claridad, nitidez y fi neza detallada de la imagen, y depende de la longitud de onda ( ) del haz de luz utilizado y de la apertura num rica del objetivo empleado. El m ximo poder de resoluci n en un microscopio de luz emitida es de m, por lo que se requiere de una amplifi ca-ci n entre 1000-1400x, mientras que el poder de reso-luci n del ojo humano es de aproximadamente mm. Para aprovechar esta ventaja de los microscopios, se han desarrollado t cnicas tintoriales que destacan las caracter sticas morfol gicas de los Existe una gran variedad de tinciones que pueden ser aplicadas dentro del campo de la microbiolog 3 N mero 1 Enero-Marzo 201411 Luis Esa L pez-J come y colorante se defi ne como una sustancia capaz de dar color a c lulas, tejidos, fi bras, etc tera. De acuerdo con su origen, se pueden dividir en: coloran-tes naturales, los cuales son extra dos de plantas o animales, y colorantes artifi ciales, que son aquellos de minerales procesados y manipulados en el micamente, el colorante est constituido de un componente crom foro y un aux cromo.

5 El crom foro es todo grupo aislado, covalente e insaturado, que tiene una absorci n caracter stica en la regi n ultra-violeta o visible; dicho de otra forma, es la capacidad que tiene la mol cula para que sus electrones absor-ban energ a o luz visible, se exciten y emitan diversos colores de acuerdo con la longitud de emitida como resultado del cambio en el nivel energ tico. Cabe mencionar que esta longitud de onda corresponde al rango de espectro visible. Los crom foros se pueden presentar en dos formas fundamentales: en sistemas conjugados pi o complejos met licos. Los crom foros son principalmente grupos funcionales con dobles y triples enlaces carbono-carbono, anillos arom ticos, grupos carbonilos, imino, diazo, nitro y enlaces entre carbono-y (y es un tomo con pares libres).Los aux -cromos son grupos funcionales o radicales que cons-tituyen una mol cula y poseen carga parcial positiva; tienen la funci n de intensifi car la formaci n de color mediante la acci n de grupos de tomos no saturados; su funci n es desplazar a los crom foros hacia longi-tudes de ondas largas para aumentar la intensidad.

6 Los siguientes grupos funcionales son considerados aux cromos: grupo metilo, hal genos, hidroxi, alcoxi y ,5 Aunque los microorganismos vivos se pueden observar directamente en fresco al microscopio ptico, la mayor a de las veces es necesario te irlos para que por medio del uso de colorantes, sea mucho m s f cil su identifi caci n;6 adem s, la presencia de ciertas estructuras, as como su reacci n a determinadas t cnicas, nos permite clasifi car a las bacterias. As pues, los colorantes tienen las siguientes funciones:1. Permiten hacer visibles a los objetos microsc picos y Revelan su forma y tama Muestran la presencia de estructuras internas y Producen reacciones qu micas espec fi tinciones se pueden clasifi car como simples cuando toda la muestra se ti e del mismo color y se utiliza un s lo colorante (azul de lactofenol o tinta china); tinci n diferencial, cuando se visualiza m s de un color porque se utiliza m s de un colorante (Gram o Ziehl-Neelsen); tinci n espec fi ca, cuando se utilizan anticuerpos marcados con una mol cula fl uorescente para identifi car una estructura celular en particular (inmunocitoqu mico).

7 2,7 El control de calidad de los m todos tintoriales es importante, ya que as se asegura que la preparaci n de la muestra haya sido adecuada, por lo que se recomienda realizar al mismo tiempo de la evaluaci n de la muestra cl nica, la tinci n de un agente infeccioso ya identifi cado mediante esa tinci n, el cual funcionar como un control t cnicas tintoriales como Gram o Ziehl-Neelsen requieren antes de su proceso la fi jaci n de las muestras, con la fi nalidad de preservar la arqui-tectura estructural y qu mica de las c Existen dos tipos de fi jadores: f sicos y qu micos. Entre los procesos de fi jaci n f sicos se tienen los siguientes: desecaci n, calor seco, calor h medo, ultrasonido y microondas, mientras que los procesos de fi jaci n qu micos se pueden clasifi car como oxidantes y re-ductores, de acuerdo con sus propiedades qu micas. Entre los agentes qu micos oxidantes se encuentran: xido cr mico, cido ac tico, cido p crico, acetona, dicromato de potasio.

8 Los agentes qu micos reducto-res son: formaldeh do, glutaraldeh do, etanol, metanol, paraldeh do, etc el m todo f sico con mayor utilizaci n en microbiolog a es el calor seco, que consiste en expo-ner directamente la laminilla a la fl ama del mechero, con esto se logra detener los procesos vitales de las c lulas y los microorganismos. Sin embargo, la so-breexposici n, o la exposici n en una zona incorrecta de la fl ama (zona fr a, zona caliente y zona de fusi n) repercutir en el efecto deseado; es muy com n pro-vocar alteraciones morfol gicas y destrucci n celular. Este m todo preserva el extendido por poco tiempo, por lo que se recomienda utilizar un m todo qu mico, que precipite prote nas, antes de te m todos qu micos ofrecen mejores resultados para la fi jaci n, ya que son l quidos con potencial alto de difusi n intracelular y detienen procesos enzim -ticos que provocan autolisis.

9 Los reactivos poseen la capacidad de interactuar con biomol culas como prote nas, glicoprote nas, peptidoglicanos, l pidos, glicol pidos, lipoprote nas, pigmentos, cidos p c-ticos y nucleicos. El metanol es el reactivo que se encuentra al alcance de todos los laboratorios; es un reactivo reductor, deshidratador, y es clasifi cado como fi jador coagulante, de tal manera, coagula prote nas y las hace insolubles, pero sin desnaturalizarlas. Se preserva la arquitectura de la pared celular y evita la sobrecoloraci n. El metanol tiene un potencial reduc-tor mayor que el etanol. La concentraci n ideal es > Investigaci n en Discapacidad12 Las tinciones b sicas en el laboratorio de microbiolog El metanol preserva la integridad de los cidos nucleicos, por lo que tambi n es ideal para inmuno-histoqu mica e hibridaci n in ,8,9A continuaci n se mencionar n las principales t c-nicas de tinci n utilizadas en microbiolog a, as como su fundamento e interpretaci n para realizar la correcta identifi caci n de los n de GramEsta tinci n es un procedimiento de gran utilidad empleado en los laboratorios donde se manejan pruebas microbiol gicas.

10 Es defi nida como una tinci n diferencial, ya que utiliza dos colorantes y clasifi ca a las bacterias en dos grandes grupos: bacterias Gram negativas y bacterias Gram Fue desarro-llada por el cient fi co dan s Hans Christian Gram en 1884; hoy en d a, sigue siendo una de las tinciones m s utilizadas universalmente debido a lo econ mico, sencillo y efi caz que En microbiolog a cl nica resulta de gran utilidad, ya que a partir de muestras cl nicas directas provenientes de sitios est riles se puede saber de manera r pida las caracter sticas de la muestra y hacer una diferencia de los potenciales microorganismos causantes de una infecci Los principios de la tinci n de Gram est n basados en las caracter sticas de la pared celular de las bacterias, la cual le confi ere propiedades determinantes a cada mi-croorganismo. La pared celular de las bacterias Gram negativas est constituida por una capa fi na de pepti-doglicano y una membrana celular externa, mientras que las bacterias Gram positivas poseen una pared celular gruesa constituida por peptidoglicano, pero no cuentan con membrana celular externa; as pues, la composici n qu mica y el contenido de peptidoglicano en la pared celular de las bacterias Gram negativas y Gram positivas explica y determina las caracter sticas tintoriales (Figura 1).